脂聯素對高糖環(huán)境下人腎小管上皮細胞凋亡及氧化應激水平的影響.pdf

1、目的:通過體外高糖環(huán)境下培養(yǎng)人近曲腎小管上皮細胞(HK-2細胞)探討脂聯素(adiponectin，ADPN)對人近曲腎小管上皮細胞凋亡及氧化應激各項指標MDA含量、SOD活性以及p66Shc mRNA、HO-1 mRNA表達水平的影響，以揭示脂聯素對糖尿病腎病的保護機制。
　　 方法:①將體外培養(yǎng)人近曲腎小管上皮細胞(HK-2細胞)在正常對照組（5.5mmol/L D-葡萄糖）、高糖組(30.0mmol/L D-葡萄糖)、脂聯

2、素組(30.0mmol/LD-葡萄糖+2.5μg/ml ADPN)中分別培養(yǎng)24h，48h，72h后，采用AnnexinV-FITC/PI雙標記染色法使用流式細胞儀測定HK-2細胞在不同時間點的凋亡率。②將體外培養(yǎng)人近曲腎小管上皮細胞在正常對照組（5.5mmol/L D-葡萄糖）、高糖組(30.0mmol/L D-葡萄糖)、脂聯素組(30.0mmol/L D-葡萄糖+2.5μg/ml ADPN)中分別培養(yǎng)24h，48h，72h后取培養(yǎng)液

3、，運用黃嘌呤氧化酶法測定HK-2細胞培養(yǎng)液中在不同時間點的超氧化物歧化酶(SOD)活性，運用硫代巴比妥酸法測定HK-2細胞培養(yǎng)液中在不同時間點的丙二醛(MDA)含量。③將體外培養(yǎng)人近曲腎小管上皮細胞在正常對照組（5.5mmol/L D-葡萄糖）、高糖組(30.0mmol/L D-葡萄糖)、脂聯素組(30.0mmol/L D-葡萄糖+2.5μg/ml ADPN)中分別培養(yǎng)24h，48h，72h后，運用實時熒光定量PCR(RT-PCR)測定

4、HK-2細胞在不同時間點的血紅素加氧酶-1(HO-1)及銜接蛋白p66Shc mRNA表達水平。
　　 結果:①與正常對照組相比，高糖組人近曲腎小管上皮細胞凋亡率顯著增高，加入脂聯素(2.5μg/ml)后細胞凋亡明顯受到抑制，并呈時間依賴性，差異有統計學意義(P＜0.05)。②與正常對照組相比，高糖組人近曲腎小管上皮細胞培養(yǎng)液內SOD活性下降，MDA含量增高，加入脂聯素(2.5μg/ml)后SOD活性增高，MDA含量降低，亦呈時

5、間依賴性，差異有統計學意義(P＜0.05)。③與正常對照組相比，高糖組誘導人近曲腎小管上皮細胞HO-1及銜接蛋白p66Shc mRNA表達上調，加入脂聯素(2.5μg/ml)后HO-1 mRNA表達進一步增強，而p66Shc mRNA表達降低，且呈時間依賴性，差異有統計學意義（P＜0.05）。
　　 結論:高糖環(huán)境下隨時間延長，人近曲腎小管上皮細胞凋亡率明顯增加，而脂聯素干預后可延緩細胞凋亡。高糖環(huán)境下隨時間延長，細胞培養(yǎng)液及細