TIP30基因敲除誘發(fā)小鼠乳腺癌的相關(guān)研究.pdf

1、乳腺癌是女性發(fā)病率最高的惡性腫瘤之一，全世界每年約有138萬婦女患乳腺癌，約45萬人死于乳腺癌[1,2]。在全球，乳腺癌發(fā)病率仍呈逐年上升趨勢;其中歐美國家近25年來乳腺癌死亡率有所下降，但在亞太及非洲很多國家乳腺癌死亡率仍在上升中[1,2]。近年來，盡管乳腺癌的診斷和治療均有了長足的進展，但關(guān)于乳腺癌的發(fā)病機理目前仍未明確。雌激素受體(Estrogenreceptor，ER)在乳腺的發(fā)育及乳腺癌的發(fā)生發(fā)展中均起了重要的作用。在人類乳腺

2、癌中，ER陽性乳腺癌就高達60-70％。臨床上已將ER檢測作為評估患者預(yù)后和選擇治療方案的指標。盡管ER陽性乳腺癌的治療效果及預(yù)后較好，但目前對于這種最常見類型乳腺癌發(fā)病機理的認識仍有限。在本研究中，我們應(yīng)用TIP30基因敲除小鼠模型探討了該亞型乳腺癌發(fā)生發(fā)展的可能機制。
　　 TIP30基因，又稱CC3或Htatip2，是1998年肖華等在研究人類免疫缺陷病毒(Humanimmunodeficiencyvirus，HIV)的體

3、外轉(zhuǎn)錄時發(fā)現(xiàn)一種分子量為30kD的Tat(Transactivatoroftranscription)結(jié)合蛋白(Tatinteractiveprotein)[3]。研究發(fā)現(xiàn)TIP30在多種腫瘤組織中的表達異常，如肺癌、乳腺癌、胃癌、結(jié)腸癌、肝細胞癌和前列腺癌等[4-9]，提示TIP30與腫瘤之間存在密切聯(lián)系。Hua等研究發(fā)現(xiàn)，TIP30基因敲除可以自發(fā)形成多種腫瘤[9,10]。這些研究提示TIP30是一種腫瘤抑制基因。TIP30具有多種

4、功能，可以作為一種轉(zhuǎn)錄共分子參與凋亡及增殖相關(guān)基因的調(diào)控[11,12]，它還可以作為細胞核轉(zhuǎn)運抑制因子調(diào)節(jié)細胞凋亡[13]。在乳腺和乳腺癌細胞中，TIP30還可以抑制ERα調(diào)節(jié)的c-myc轉(zhuǎn)錄[12]。近來研究發(fā)現(xiàn)，在肝癌和肺癌中，TIP30可以調(diào)控EGFR細胞漿內(nèi)轉(zhuǎn)運和下游信號通路的活性[14,15]。
　　 我們先前的研究發(fā)現(xiàn)，TIP30基因敲除可以誘發(fā)小鼠乳腺導(dǎo)管增生，而且隨著年齡的增長，增生程度越明顯。同時，我們在有Er

5、bb2(Neu)轉(zhuǎn)基因背景的FVB小鼠中敲除TIP30，發(fā)現(xiàn)TIP30基因缺失可以加速小鼠乳腺癌發(fā)生，而且所有自發(fā)性乳腺癌均為ER陽性乳腺癌。而在本研究中，我們排除了Neu基因的影響，發(fā)現(xiàn)在Balb/c背景的小鼠中敲除TIP30便能誘發(fā)小鼠乳腺癌。為了進一步研究其可能的機制，我們對該小鼠模型EGFR下游信號分子進行了初步的探討，并在人乳腺癌細胞株中研究了TIP30基因在EGFR降解中的調(diào)節(jié)作用。
　　 由于乳腺癌是異質(zhì)性相當大的

6、腫瘤，其病理和分子學(xué)特點具有多樣性復(fù)雜性。近年來，乳腺腫瘤形成的干細胞模型為乳腺癌的異質(zhì)性及不同乳腺癌亞型的起源提供了解釋[16,17]。這一模型認為不同乳腺腫瘤亞型是起源于不同的乳腺干細胞或祖細胞，而特異性的突變可使這些細胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化，從而使其自我更新失控及異常分化，最終誘發(fā)腫瘤發(fā)生。此外，在小鼠的研究中發(fā)現(xiàn)，不同基因?qū)Σ煌瑏喨喝橄偕掀ぜ毎绊懖煌?，而且會影響乳腺癌亞型的發(fā)生。比如，乳腺癌病毒(mmTv)-Wnt-1小鼠可以擴增乳腺

7、干細胞亞群，同時形成luminal型和basal型乳腺癌[18-20]。而mmTv-Neu小鼠可以促進luminal細胞群擴增，僅產(chǎn)生luminal型且ER/PR陰性乳腺癌[21,22]。因此通過在小鼠動物模型中研究特定基因?qū)θ橄偌毎麃喨杭澳[瘤類型形成的影響將有助于增強對乳腺癌發(fā)病機理的了解。此外，我們先前的研究發(fā)現(xiàn)，TIP30基因敲除后可以使Neu轉(zhuǎn)基因小鼠乳腺癌的表型由ER-/PR-陰性轉(zhuǎn)變?yōu)镋R+/PR-，提示TIP30基因不只是

8、個抑癌基因，它在乳腺癌表型的決定上也可能起了一定的作用。因此，本研究在干細胞層面探討了TIP30基因缺失對乳腺干細胞/祖細胞亞群及其分化傾向方面可能存在的作用，并為該動物模型形成的限制性ER陽性乳腺癌提供了一定的解釋。
　　 第一部分TIP30基因敲除誘發(fā)小鼠乳腺癌及活化EGFR下游通路的研究
　　 一、材料與方法
　　 1.通過雜交的方法，獲得TIP30基因敲除的Balb/c小鼠，連續(xù)傳代7代以上，獲得Balb

9、/c純合背景的TIP30基因敲除小鼠。
　　 2.所有Balb/c小鼠飼養(yǎng)至滿78周時，二氧化碳吸入處死，詳細檢查小鼠大腦、乳腺、胸腔臟器、腹腔臟器、生殖器官等肉眼可見部位有無腫瘤和其它疾病出現(xiàn)。常規(guī)組織固定、石蠟包埋并切片。部分組織丟入液氮速凍，最后于-80℃保存。
　　 3.應(yīng)用蘇木精-伊紅(H&E)染色法檢測組織器官及乳腺腫瘤組織形態(tài)結(jié)構(gòu)。切片由兩位病理學(xué)家閱片并分析。計算發(fā)生乳腺癌的小鼠百分比。
　　 4

10、.應(yīng)用免疫組織化學(xué)(IHC)法檢測乳腺組織或腫瘤組織CK8、αSMA、pAkt、pERK表達。
　　 5.應(yīng)用免疫熒光染色(IF)法檢測乳腺腫瘤組織ER及PR表達情況。
　　 6.應(yīng)用shRNA-TIP30及shRNA-CON質(zhì)粒包裝慢病毒顆粒，感染MCF-7細胞，puromycin篩選，并經(jīng)Western-blot檢測驗證基因干擾效果。
　　 7.應(yīng)用細胞免疫熒光方法檢測經(jīng)EGF誘導(dǎo)的MCF-7細胞在不同時間點

11、EGF與EGFR、EGFR與EEA1及TIP30與EEA1的共表達情況。
　　 8.統(tǒng)計處理:實驗結(jié)果以均數(shù)±標準差((x)±s)表示，數(shù)據(jù)處理采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件。兩組的腫瘤發(fā)生率比較采用x2檢驗;兩組及多組間均數(shù)比較分別采用獨立樣本t檢驗和單向方差分析;兩組不同時間點均數(shù)比較采用重復(fù)測量方差分析;多重比較采用LSD檢驗或Dunnett檢驗。P≤0.05(雙側(cè))表示差異有顯著性。
　　 二、結(jié)果
　　

12、1.TIP30基因敲除可導(dǎo)致Balb/c小鼠自發(fā)性乳腺腫瘤出現(xiàn)
　　 經(jīng)過18個月的密切觀察，共有47只雌性未孕小鼠完成實驗觀察。28只Tip30-/-小鼠中有8只發(fā)現(xiàn)乳腺自發(fā)腫瘤(發(fā)病率28.6％)，而19只Tip30+/+小鼠中均未發(fā)現(xiàn)有乳腺自發(fā)腫瘤(0％)。Tip30-/-小鼠乳腺自發(fā)腫瘤的發(fā)生率顯著高于Tip30+/+小鼠，x2=6.269，P=0.012。
　　 2.TIP30基因敲除致Balb/c小鼠乳腺腫瘤

13、均為ER/PR陽性luminal型
　　 我們應(yīng)用luminal標志CK8和basal標志αSMA對乳腺腫瘤組織行免疫組織化學(xué)染色，結(jié)果提示，所有腫瘤組織CK8染色呈強陽性，而αSMA染色陰性，提示Tip30-/-小鼠自發(fā)乳腺腫瘤均為luminal型。進一步的ER及PR免疫熒光染色，結(jié)果顯示所有腫瘤均為ER陽性和PR陽性乳腺癌。提示Tip30-/-小鼠自發(fā)乳腺腫瘤為ER/PR陽性luminal型腫瘤。
　　 3.TIP3

14、0基因敲除可致EGFR下游MAPK及PI3K信號通路的活化
　　 我們應(yīng)用了免疫組化對乳腺及腫瘤組織pErk1/2及pAkt進行檢測。Tip30-/-小鼠乳腺上皮細胞pErk1/2及pAkt陽性率分別為27.83±8.46％和30.83±6.65％(n=5)，顯著高于Tip30+/+小鼠乳腺上皮細胞的12.58±5.87％和14.94±5.77％(n=5)，P值分別0.02和0.011。而Tip30-/-小鼠乳腺腫瘤細胞pErk

15、1/2及pAkt陽性率分別為51.68±8.57％和56.08±8.44％(n=5)，則顯著高于Tip30-/-小鼠乳腺上皮細胞的27.83±8.46％和30.83±6.65％，P分別為0.002和0.001。
　　 4.TIP30表達下調(diào)可延遲EGF誘導(dǎo)的人乳腺癌細胞中EGFR的降解。
　　 4.1TIP30-SH1、TIP30-SH2乳腺細胞株MCF-7的TIP30蛋白明顯抑制
　　 乳腺癌細胞株MCF-7通

16、過shRNA干擾后，以內(nèi)參β-actin為標準，TIP30-SH1和TIP30-SH2細胞TIP30蛋白表達相對值分別為13.12±3.95％和11.54±2.68％(n=3)，顯著低于shRNA-CON細胞的84.3±8.66％(n=3)，P均＜0.001。TIP30-SH1及TIP30-SH2細胞TIP30蛋白表達分別下降達71.18％及72.76％，這些結(jié)果提示基因轉(zhuǎn)染后TIP30-SH1、TIP30-SH2細胞TIP30表達被顯

17、著抑制。
　　 4.2TIP30在乳腺癌細胞中可促進EGF誘導(dǎo)的EGFR降解
　　 TIP30-SH組細胞在經(jīng)EGF作用后，10min和1h時EGF及EGFR的熒光強度與shRNA-CON組相比，均無統(tǒng)計學(xué)差異;4h時兩組EGF及EGFR熒光強度均顯著下降，其中TIP30-SH組細胞EGF及EGFR的熒光強度分別為1.19±0.18和1.33±0.13，顯著性高于shRNA-CON組0.68±0.08和0.76±0.10

18、，t值分別為4.563和6.132，P值分別為0.01和0.004，以上結(jié)果提示細胞的TIP30基因干擾后，EGF及EGFR降解速度減慢，于4h時仍有大量EGF及EGFR未降解。
　　 同時檢測EGF及EGFR共定位情況時發(fā)現(xiàn)，兩組細胞EGF及EGFR在10min時Pearson's共定位值最高，隨時間延長逐漸降低。于4h時，TIP30-SH組共定位值為35.07±5.33，顯著性高于shRNA-CON組的10.76±2.28，

19、t=7.270，P=0.002。提示相對于shRNA-CON組，TIP30-SH組細胞EGF及EGFR推遲分離降解，有更多的EGF/EGFR結(jié)合物存在于細胞內(nèi)。
　　 4.3TIP30基因下調(diào)可延長EGFR在早期內(nèi)涵體內(nèi)聚集時間
　　 TIP30-SH及shRNA-CON細胞在經(jīng)EGF處理2小時后，shRNA-CON細胞EGFR綠色熒光與EEA1紅色熒光Pearson's共定位值為27.31±9.12％，顯著性低于TIP

20、30-SH細胞組的56.39±14.08％，t=3.003，P=0.04。提示TIP30基因干擾后，EGFR的推遲從早期內(nèi)涵體分離。
　　 4.4TIP30可聚集于早期內(nèi)涵體內(nèi)，參與EGFR代謝
　　 EGF處理shRNA-CON細胞10分鐘后，激光共聚焦顯微鏡下TIP30綠色熒光與EEA1紅色熒光明顯重疊，提示TIP30在早期進入內(nèi)涵體參與EGFR轉(zhuǎn)運。
　　 三、結(jié)論
　　 1.TIP30基因敲除的B

21、alb/c小鼠可自發(fā)乳腺癌。
　　 2.TIP30基因敲除的Balb/c小鼠所發(fā)生乳腺癌均為ER/PR陽性luminal型腫瘤。
　　 3.TIP30基因敲除可以激活乳腺及乳腺癌中EGFR下游MAPK及PI3K信號通路分子。
　　 4.TIP30基因抑制可干擾EGFR自內(nèi)涵體分離，抑制EGF誘導(dǎo)的EGFR降解，導(dǎo)致EGFR下游信號分子持續(xù)激活。
　　 第二部分TIP30基因敲除誘導(dǎo)小鼠乳腺干/祖細胞擴增并

22、影響其分化傾向的研究
　　 一、材料與方法
　　 1.通過雜交的方法，獲得TIP30基因敲除的Balb/c及Neu+/+FVB小鼠，連續(xù)傳代7代以上，獲得各種系純合背景的TIP30基因敲除小鼠。
　　 2.解剖收集5-6月齡小鼠乳腺組織并剪碎，用無血清膠原酶溶液消化，獲得乳腺上皮細胞懸液。
　　 3.應(yīng)用細胞懸浮球形培養(yǎng)方法檢測各基因表型小鼠乳腺上皮細胞乳腺小球形成能力。顯微鏡下拍照并計算乳腺小球數(shù)量及大

23、小。
　　 4.應(yīng)用體外克隆形成試驗檢測各基因表型小鼠乳腺上皮細胞克隆形成能力。顯微鏡下拍照并計算克隆形成數(shù)及大小。
　　 5.應(yīng)用流式細胞儀分析各基因表型小鼠乳腺上皮細胞CD24HighCD49flow(MRUs)及CD24HighCD49flow(Ma-CFCs)百分比例，并分析CD24HighCD49flow群中Sca(1)+及Sca(1)-比例。
　　 6.應(yīng)用流式細胞儀分選出Balb/c小鼠各基因表型乳

24、腺上皮細胞中祖細胞群CD24HighCD49flow并行體外克隆形成試驗，收集克隆并行ER/PR免疫熒光染色。
　　 7.應(yīng)用免疫熒光法檢測Balb/c小鼠各基因表型乳腺組織ER/PR表達情況。
　　 8.應(yīng)用qPCR檢測Balb/c小鼠各基因表型乳腺組織中與乳腺干/祖細胞分化相關(guān)的因子表達情況。
　　 9.應(yīng)用Western-blot檢測Balb/c各基因表型小鼠乳腺組織FOXA1及RANKL表達。
　　

25、 10.應(yīng)用shRNA-FOXA1及shRNA-CON質(zhì)粒包裝慢病毒顆粒，感染乳腺細胞，puromycin篩選，并經(jīng)Western-blot檢測驗證基因干擾效果后，行體外克隆形成試驗并行克隆ER免疫熒光染色。
　　 11.統(tǒng)計處理:實驗結(jié)果以均數(shù)±標準差((x)±s)表示，數(shù)據(jù)處理采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件，兩組及多組間均數(shù)比較分別采用獨立樣本t檢驗和單向方差分析;多重比較采用LSD檢驗或Dunnett檢驗。P(＜)0.05

26、(雙側(cè))表示差異有顯著性。
　　 二、結(jié)果
　　 1.TIP30基因敲除可促進乳腺干/祖細胞群擴增
　　 1.1TIP30基因敲除可增強乳腺上皮細胞體外乳腺小球形成能力
　　 小鼠乳腺上皮細胞經(jīng)體外懸浮無血清培養(yǎng)9天后，Tip30-/-Balb/c小鼠每5000個乳腺上皮細胞形成乳腺小球數(shù)目為31.75±5.85個，顯著性多于Tip30+/+Balb/c小鼠的19.75±4.79個，t=3.174，P=0

27、.019。而Tip30-/-Neu+/+FVB及Tip30+/+Neu+/+FVB小鼠的乳腺小球形成數(shù)目分別為31.25±5.56個/5000細胞及17.5±4.04個/5000細胞，具有顯著性差異(t=4.001，P=0.007)。
　　 同時檢測乳腺小球直徑，Tip30-/-Balb/c小鼠乳腺小球直徑為156.80±29.28μm，顯著性大于Tip30+/+Balb/c小鼠的97.59±20.66μm，t=3.305，P=

28、0.016;而在Tip30-/-Neu+/+FVB小鼠乳腺小球的直徑為128.29±27.83μm，雖然高于Tip30+/+Neu++FVB小鼠的105.53±14.19μm，但無顯著性差異(t=1.457，P=0.195)。
　　 1.2TIP30基因敲除可增強乳腺上皮細胞體外克隆形成能力
　　 將從小鼠乳腺組織獲得的乳腺上皮細胞單細胞懸液按照2000細胞每孔種植于鋪有Matrigel孔板中，培養(yǎng)10天。Tip30/B

29、alb/c小鼠的體外克隆形成數(shù)目為33.33±5.13，顯著性多于Tip30+/+Balb/c小鼠的19.00±6.00，t=3.144，P=0.035。而Tip30-/-Neu+/+FVB小鼠的體外克隆形成數(shù)目亦顯著性高于Tip30+/+Neu+/+FVB小鼠(33.00±5.29vs.18.00±4.36，t值3.709，P值為0.019)。
　　 在檢測克隆大小時發(fā)現(xiàn)，Tip30-/-Neu+/+FVB小鼠的克隆直徑雖然大

30、于Tip30+/+Neu+/+FVB小鼠(126.68±25.42μmvs.97.41±13.13μm)，但無顯著差異(t=1.772，P=0.151)。而Balb/C背景的Tip30基因敲除小鼠的克隆大小顯著性高于Tip30+/+Balb/C小鼠(137.9±16.17μmvs.90.79±22.89μm)，t值為2.914，P值為0.044。
　　 1.3TIP30基因敲除可擴增小鼠乳腺干細胞
　　 MRUs即乳腺再

31、繁殖單位(CD24HighCD49flow)，該細胞群富集乳腺干細胞。流式細胞儀檢測結(jié)果顯示，Tip30基因敲除的Balb/C小鼠的MRUs百分比為2.83±0.51％，顯著性高于Tip30+/+Balb/C小鼠的1.27±0.51％，t值為3.739，P值為0.02。在有Neu轉(zhuǎn)基因背景的FVB小鼠中亦得到相似結(jié)果，Tip30-/-Neu+/+FVB小鼠MRUs的百分比為6.73±0.85％，顯著性高于Tip30+/+Neu+/+FV

32、B小鼠的1.30±0.60％,t=9.042,P=0.001。
　　 1.4TIP30基因敲除可擴增小鼠乳腺祖細胞
　　 Ma-CFCs即乳腺克隆形成細胞(CD24HighCD49flow)，該細胞群富集乳腺祖細胞。同樣應(yīng)用流式細胞儀檢測，Tip30-/-Balb/C小鼠的Ma-CFCs百分比(3.23±0.49％)顯著性高于Tip30+/+Balb/C小鼠(0.87±0.38％)，t值為6.592，P值為0.003。T

33、ip30-/-Neu+/+FVB小鼠的Ma-CFCs百分比為3.07±0.76％，顯著性高于Tip30+/+Neu+/+FVB小鼠的1.43±0.31％，t=3.465，P=0.026。
　　 2.TIP30基因敲除可導(dǎo)致乳腺ER+祖細胞比例增多
　　 在Balb/c小鼠中，應(yīng)用Sca(1)對乳腺祖細胞再劃分為CD24HighCD49flowSca(1)+及CD24HighCD49flowSca(1)-兩個亞群，分別代表

34、ER+祖細胞及ER-祖細胞。流式細胞儀檢測結(jié)果顯示:Tip30-/-Balb/c小鼠乳腺ER+祖細胞占祖細胞的30.67±2.45％，顯著性高于Tip30+/+Balb/c小鼠的17.73±1.76％，t=7.415，P=0.002;而Tip30-/-Neu+/+FVB小鼠ER+祖細胞占祖細胞的23.80±5.27％，顯著性高于Tip30+/+Neu+/+FVB的13.57±2.70％,t=2.994,P=0.04。
　　 3.

35、TIP30基因敲除可導(dǎo)致乳腺祖細胞傾向ER+細胞分化
　　 我們運用流式細胞儀分選出乳腺祖細胞亞群(CD24HighCD49flow)，使其在Matrigel上分化生長形成克隆，并進行ER/PR免疫熒光染色。結(jié)果如圖及表示，Tip30-/-Balb/c小鼠的乳腺祖細胞形成的克隆中ER陽性細胞數(shù)占45.35±7.80％，顯著性高于Tip30+/+Balb/c小鼠的31.77±6.38％，t=2.698，P=0.036。而Tip30

36、-/-Balb/c和Tip30+/+Balb/c小鼠的乳腺祖細胞形成的克隆中PR陽性細胞數(shù)分別為38.70±8.45％及33.76±6.33％，無顯著性差異(t=0.936，P=0.385)。
　　 為了進一步驗證TIP30基因?qū)R+細胞分化的影響，我們對Balb/c小鼠乳腺組織行ER/PR免疫熒光染色，結(jié)果示Tip30-/-Balb/c和Tip30+/+Balb/c小鼠乳腺組織ER陽性細胞分別占21.13±3.59％和13.

37、00±3.716％，t=3.15，P=0.020，有顯著性差異;而PR陽性細胞分別占18.53±2.83％和16.77±3.16％，t=0.832，P=0.437，無顯著性差異。
　　 4.TIP30基因敲除可上調(diào)乳腺組織FOXA1表達
　　 我們在mRNA水平檢測了與乳腺干/祖細胞分化相關(guān)的信號通路分子Notch、Hedgehog、Wnt及GATA3、FOXA1的表達情況，應(yīng)用獨立樣本t檢驗，結(jié)果僅有FOXA1在TIP

38、30基因敲除的乳腺組織中高表達，其相對表達值為3.05±0.90，顯著性高于p30+/+Balb/c小鼠的1.00±0.17，t=3.879，P=0.018。進一步我們對其蛋白水平進行檢測，發(fā)現(xiàn)，Tip30-/-Balb/c小鼠乳腺組織FOXA1蛋白表達相對值為66.24±5.93％，亦顯著性高于Tip30+/+Balb/c小鼠的40.27±8.18％，t=4.454，P=0.011。提示TIP30基因的缺失可能使FOXA1的表達的上調(diào)

39、，從而誘導(dǎo)更多的ER陽性細胞分化。
　　 5.下調(diào)乳腺細胞FOXA1表達可減少ER陽性細胞分化
　　 為了進一步驗證TIP30基因敲除導(dǎo)致的ER陽性細胞分化增多是否通過升高FOXA1表達而實現(xiàn)。我們從Tip30-/-Balb/c小鼠分離出乳腺上皮細胞，應(yīng)用FOXA1-SH1、FOXA1-SH2及shRNA-CON基因干擾后，應(yīng)用Western-blot檢測驗證FOXA1表達明顯示受抑制后，行體外克隆形成試驗，并進行ER免

40、疫熒光染色。結(jié)果示FOXA1-SH1、FOXA1-SH2組形成的克隆中ER陽性細胞分別占31.00±2.85％及29.52±5.67％，顯著性低于shRNA-CON組的39.40±6.16％，P值分別為0.042及0.018。該結(jié)果提示，TIP30基因敲除后，通過(至少部分通過)升高FOXA1的表達來促進乳腺祖細胞傾向ER陽性細胞分化。
　　 6.TIP30基因敲除可以上調(diào)乳腺組織RANKL的表達
　　 我們在進一步研究

41、TIP30基因敲除小鼠乳腺干/祖細胞擴增可能的原因時發(fā)現(xiàn)，TIP30基因敲除可以使小鼠乳腺組織RANKL表達增高，其相對表達值為16.91±1.13，顯著性高于野生型小鼠的7.94±4.47，t=3.370，P=0.028。提示TIP30基因敲除小鼠可能通過依靠增多的性激素受體細胞增強分泌RANKL，并通過旁分泌的方式作用于乳腺干/祖細胞，從而使其擴增。
　　 三、結(jié)論
　　 1.TIP30基因敲除可以擴增小鼠乳腺干/祖