運(yùn)用mRNA差異顯示技術(shù)分離乳腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)基因的研究.pdf

1、乳腺癌是一種嚴(yán)重威脅女性健康的惡性腫瘤.近年來歐美國投入大量經(jīng)費(fèi)及科研力量進(jìn)行臨床及基礎(chǔ)研究,但其死亡率仍居高不下,原因主要是由于遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)殉沒有得到有效控制.為了從分子基礎(chǔ)上對(duì)乳腺癌的轉(zhuǎn)移進(jìn)行研究,該實(shí)驗(yàn)采用mRNA差異顯示技術(shù)分離乳腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)基因,以期對(duì)揭示乳腺癌轉(zhuǎn)移機(jī)理有所幫助.mRNA差異顯示(mRNA differential display)技術(shù)作為表型克隆技術(shù)的一種,為近年來未知基因篩選的研究中所普遍采用并被不斷優(yōu)化,主要方

2、法是用隨機(jī)引物差別篩選擴(kuò)增的cDNA.該方法簡(jiǎn)便、靈敏、適應(yīng)實(shí)驗(yàn)室條件.該實(shí)驗(yàn)以乳腺原位癌組織及乳腺轉(zhuǎn)移癌組織為樣品,采用3種錨錠引物及2種隨機(jī)引物進(jìn)行DDRT-PCR,共發(fā)現(xiàn)17條在乳腺原位癌組織及乳腺轉(zhuǎn)移癌組織中差異表達(dá)的cDNA片段.將這17個(gè)cDNA片段連接入載體pGEM-T Easy,進(jìn)行克隆,所得的重組質(zhì)粒經(jīng)酶切鑒定后,進(jìn)行外源片段測(cè)序.所得序列在Genbank中檢索,發(fā)現(xiàn)4個(gè)未曾登錄的新基因,其中def7和def8現(xiàn)已提交