采用mRNA差異顯示技術(shù)分離鹽生植物狐米草(Spartina patens)耐鹽相關(guān)基因的研究.pdf

1、南開(kāi)大學(xué)碩士學(xué)位論文采用mRNA差異顯示技術(shù)分離鹽生植物狐米草(Spartinapatens)耐鹽相關(guān)基因的研究姓名：吳學(xué)鋒申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：遺傳學(xué)指導(dǎo)教師：杜榮騫2002.5.1采穰nlRN^差異顯示技術(shù)分離鹽生植物舔采草(Spartinapatens)耐掛相關(guān)基因的研究摘要摘要植物耐鹽性研究對(duì)消除鹽堿地對(duì)人類的威脅有著重要的理論和實(shí)踐意義。耐鹽基因的分離已成為這一研究領(lǐng)域最為艱難、最具創(chuàng)新性的課題之一，而mRNA差異顯示技術(shù)在

2、分離未知基因方面有其獨(dú)到的優(yōu)勢(shì)。本研究以鹽生植物狐米草(Spartinapatens)為材料，采用mRNA差異顯示技術(shù)(DDRTPCR)進(jìn)行了分離耐鹽相關(guān)基因的有益嘗試。一—、、一首先探討了狐米草在鹽脅迫條件下與對(duì)照材料全蛋白電泳帶譜的差異，SDSPAGE表明：27KDa、75KDa的兩種蛋白被明顯誘導(dǎo)，同時(shí)許多小分子量蛋白亦被鹽脅迫所誘導(dǎo)。這一結(jié)果驗(yàn)證了植物適應(yīng)鹽脅迫在蛋白表達(dá)上的差異，同時(shí)為進(jìn)一步的mRNA差異顯示分離基因提供了依據(jù)

3、。分別以鹽脅迫和對(duì)照材料的總RNA反轉(zhuǎn)錄合成的eDNA為模板，進(jìn)行了不同的錨定引物與任意引物組合的差異顯示，發(fā)現(xiàn)鹽脅迫條件下mRNA差異表達(dá)的不同情形。經(jīng)Northern點(diǎn)雜交檢測(cè)后，最終確定5個(gè)差異片段：SRGl(APlRP4組合)，SRG2、SIGl、SIG2、SIG3(AP2RP2組合)。其中SRGl、SRG2為鹽脅迫抑制表達(dá)的片段，SIGl、SIG2、SIG3為鹽脅迫誘導(dǎo)表達(dá)的片段。對(duì)5個(gè)差異片段進(jìn)行克隆、測(cè)序，并在NCBI數(shù)據(jù)

4、庫(kù)系統(tǒng)分別進(jìn)行核苷酸和氨基酸序列同源性信息查詢。結(jié)果發(fā)現(xiàn)5個(gè)片段的序列與已知基因沒(méi)有明顯同源性，認(rèn)為它們是未知序列；選取GenBank中est子數(shù)據(jù)庫(kù)查詢差異片段的翻譯氨基酸順序與GenBank中EST部分的同源性，采用blastx程序分析差異片段的序列及ESTs，分析結(jié)果表明：SRGl翻譯氨基酸順序與ATPaseIllsubunit、H一transportingATPsynthaselike有很高的同源性(達(dá)88％)，SRG2、SIG