苯作業(yè)工人血漿差異表達(dá)microRNA篩選及尿中代謝產(chǎn)物檢測(cè).pdf

1、目的:(1)調(diào)查苯作業(yè)工人外周血象狀況及影響工人白細(xì)胞水平的因素，為更好保護(hù)苯作業(yè)工人健康提供建議和對(duì)策。(2)篩選苯作業(yè)工人血漿差異表達(dá)microRNA(miRNA)，并進(jìn)行靶基因預(yù)測(cè)及生物信息學(xué)分析，探討血漿miRNA在苯引起工人職業(yè)健康損傷中的潛在作用。(3)檢測(cè)低濃度苯作業(yè)工人外周血象及尿中反反式粘糠酸(tt-MA)、8-羥基脫氧鳥(niǎo)苷(8-OHdG)濃度，探討低濃度苯接觸是否引起工人健康損害及尿中代謝產(chǎn)物濃度改變，為篩選苯的暴露

2、及早期效應(yīng)標(biāo)志提供依據(jù)。
　　方法:(1)對(duì)1172名調(diào)查對(duì)象（高濃度組256人，低濃度組574人，對(duì)照組342人）進(jìn)行血常規(guī)檢查和問(wèn)卷調(diào)查，采用趨勢(shì)x2檢驗(yàn)或Fisher確切概率法進(jìn)行構(gòu)成比及率的比較，采用單因素方差分析檢驗(yàn)各因素對(duì)白細(xì)胞計(jì)數(shù)的影響，采用有序多分類logistic逐步回歸分析白細(xì)胞減少的危險(xiǎn)因素。(2)提取血細(xì)胞降低、血細(xì)胞波動(dòng)及正常苯作業(yè)工人和不接苯工人血漿RNA，進(jìn)行微陣列芯片分析獲得差異表達(dá)的miRNAs，

3、選取四個(gè)差異表達(dá)miRNAs進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR(RT-qPCR)驗(yàn)證。應(yīng)用Targetsean、Pictar及miRanda等三個(gè)軟件預(yù)測(cè)14個(gè)差異顯著且信號(hào)值較大的miRNAs的潛在靶基因，然后利用David6.7在線平臺(tái)作基因本體論(GO)和KEGG通路分析（pathway analysis）。(3)對(duì)256名低濃度接苯工人和155名不接苯工人進(jìn)行血常規(guī)檢查和問(wèn)卷調(diào)查，采集班末尿，利用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(HPCL-MS/MS)

4、測(cè)定作業(yè)工人尿中8-羥基脫氧鳥(niǎo)苷(8-OHdG)和反反式粘糠酸（tt-MA）濃度，使用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　結(jié)果:(1)隨著苯接觸濃度和工齡增加，工人白細(xì)胞異常率升高(P＜0.01);隨著苯接觸濃度增加，工人白細(xì)胞波動(dòng)率及降低率升高(P＜0.01);不同苯接觸濃度、性別、工齡、吸煙及飲酒情況工人白細(xì)胞計(jì)數(shù)有差異(P＜0.05);苯濃度升高、工齡延長(zhǎng)、年齡≥45歲、工作場(chǎng)所空氣中存在甲醛等化學(xué)毒物及居住環(huán)

5、境存在嚴(yán)重污染項(xiàng)目是苯作業(yè)工人白細(xì)胞計(jì)數(shù)減少的危險(xiǎn)因素，吸煙使白細(xì)胞計(jì)數(shù)升高。(2)微陣列芯片篩查出四組間差異表達(dá)miRNAs有136個(gè)，聚類分析結(jié)果顯示差異表達(dá)miRNAs中有三類比較顯著的表達(dá)模式。miR-638經(jīng)RT-qPCR驗(yàn)證，與芯片結(jié)果一致，且相對(duì)于對(duì)照組及正常組，在血細(xì)胞降低組miR-638顯著上調(diào)。對(duì)14個(gè)差異顯著且信號(hào)值較大的miRNAs進(jìn)行潛在靶基因預(yù)測(cè)，共得到438共同靶基因。經(jīng)GO生物學(xué)過(guò)程分析發(fā)現(xiàn)25個(gè)預(yù)測(cè)靶基

6、因涉及造血作用、血細(xì)胞活化、增殖及分化。由David6.7預(yù)測(cè)的靶基因富集明顯的通路有18條，其中Focal adhesion、Cytokine-cytokine receptor interaction、MAPK signaling pathway及Chemokine signaling pathway等通路與慢性苯毒性關(guān)聯(lián)較緊密。(3)低濃度苯作業(yè)工人與對(duì)照工人血常規(guī)指標(biāo)存在顯著性差異，尿中tt-MA含量差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.

7、01);白細(xì)胞計(jì)數(shù)與接苯工齡及尿中tt-MA、8-OHdG濃度存在負(fù)相關(guān)關(guān)系。
　　結(jié)論:(1)白細(xì)胞計(jì)數(shù)是苯作業(yè)工人較敏感的血液毒性效應(yīng)指標(biāo)，苯接觸濃度增加、工齡延長(zhǎng)、年齡≥45歲、工作場(chǎng)所空氣中存在甲醛等化學(xué)毒物及居住環(huán)境存在嚴(yán)重污染項(xiàng)目可增加苯作業(yè)工人白細(xì)胞計(jì)數(shù)減少的危險(xiǎn)性，吸煙使白細(xì)胞計(jì)數(shù)升高。(2)血細(xì)胞降低組、血細(xì)胞波動(dòng)組、正常組及對(duì)照組間存在多個(gè)差異表達(dá)miRNAs，并具有明顯聚類表達(dá)模式。生物信息學(xué)分析表明差異表達(dá)