延邊黃牛體細(xì)胞克隆無血清成熟液的研究.pdf

1、使用無血清培養(yǎng)液來進(jìn)行卵母細(xì)胞的體外成熟培養(yǎng)和胚胎的發(fā)育培養(yǎng)，盡管近年來有人在不斷嘗試，但是還存在一定的要改進(jìn)的地方。本實(shí)驗(yàn)將屠宰后延邊黃牛的卵巢從屠宰場取回，用手術(shù)剪刀將多余組織剪掉，之后用溫度為38℃的生理鹽水洗凈，采用抽吸法回收卵母細(xì)胞，在不同的無血清成熟液條件下進(jìn)行卵母細(xì)胞的體外成熟培養(yǎng)，然后對成熟卵母細(xì)胞進(jìn)行核移植、融合、激活以及胚胎的體外培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)分別對牛卵泡液（BFF，bovine follicular fluid）、聚乙

2、烯醇(PVA，polyvinyl alcohol)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP，polyvinylpyrrolidone)、牛血清白蛋白(BSA，bovine serum albumin)等無血清成熟液進(jìn)行了研究。得出的實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：
　　1、在不同濃度的牛卵泡液對卵母細(xì)胞體外成熟及發(fā)育率的影響的實(shí)驗(yàn)中，添加10％BFF時的成熟率、卵裂率、4-6細(xì)胞發(fā)育率和8-16細(xì)胞發(fā)育率都要高于其他組，結(jié)果顯示10%BFF是添加卵泡液的最佳濃度。

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　　2、在 BFF是否滅活對卵母細(xì)胞體外成熟及發(fā)育率的影響的實(shí)驗(yàn)中，在成熟上沒有顯著差異；但是在卵裂率上差異顯著。結(jié)果表明：卵泡液雖然可以代替血清，但是像血清一樣滅活以后使用是沒有必要的。
　　3、在 PVA的濃度對卵母細(xì)胞體外成熟及發(fā)育率的影響的實(shí)驗(yàn)中，成熟率1.0 mg/ml組最高，但和1.5mg/ml組之間沒有差異，1.0mg/ml組在早期發(fā)育上較其他組要高，PVA的添加量大于1.5 mg/ml時，雖然卵裂，但都為異

4、常胚胎，卵裂率要低于不添加組。所以1.0 mg/ml的PVA是卵母細(xì)胞體外成熟的最佳濃度。
　　4、確定了 PVA和 BFF的最佳濃度后，將二者結(jié)合使用，經(jīng)過 PVA和 BFF的結(jié)合添加，我們得到的結(jié)論是：將二者結(jié)合添加以后要明顯好于不添加組合和單獨(dú)添加組。
　　5、在不同濃度的PVP對卵母細(xì)胞體外成熟及發(fā)育率的影響的實(shí)驗(yàn)中，經(jīng)過實(shí)驗(yàn)測得：添加0.3%的PVP的成熟率、卵裂率和發(fā)育率綜合考慮要好于其他組，所以適合卵母細(xì)胞體外

5、成熟及發(fā)育的PVP的最好濃度是0.3%。
　　6、在不同濃度的BSA對卵母細(xì)胞體外成熟及發(fā)育率的影響的實(shí)驗(yàn)中，經(jīng)過實(shí)驗(yàn)測得：對卵裂率和發(fā)育率的影響綜合考慮0.4 mg/ml組要好于其他組，但是PVP的濃度對卵母細(xì)胞的體外成熟的影響不大。所以適合卵母細(xì)胞體外成熟及發(fā)育的BSA的最好濃度是0.4mg/ml。
　　7、經(jīng)過各種無血清成熟液之間的比較的得到的結(jié)果是：成熟率各組之間沒有差異，表示幾種無血清成熟液在卵母細(xì)胞體外成熟上可以