抗氧化劑對(duì)延邊黃牛體細(xì)胞克隆胚胎體外發(fā)育的影響.pdf

1、【目的】本實(shí)驗(yàn)以活性氧（Reactive Oxygen Species，ROS）對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生的傷害為出發(fā)點(diǎn)，通過(guò)添加不同種類不同濃度抗氧化劑，從而確定適合延邊黃牛體細(xì)胞克隆胚胎體外培養(yǎng)液的最佳添加濃度，評(píng)價(jià)其對(duì)體細(xì)胞克隆胚胎發(fā)育潛力的影響，致力于解決細(xì)胞由于過(guò)氧化物的存在而造成的發(fā)育阻滯（Development Block），減少氧化應(yīng)激（Oxidative Stress，OS），提高體細(xì)胞克隆效率。
　　【方法】將經(jīng)體細(xì)胞克隆操作

2、所形成的胚胎隨機(jī)放在不同種類、不同濃度抗氧化劑條件下進(jìn)行體外培養(yǎng)，觀察其卵裂率及囊胚率，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　【結(jié)果】
　　1.在延邊黃牛體細(xì)胞克隆胚胎體外培養(yǎng)液中分別添加不同濃度的N-乙酰-L-半胱氨酸（N-Acetyl-L-Cysteine，NAC）對(duì)延邊黃牛體細(xì)胞克隆胚胎體外發(fā)育效率影響的試驗(yàn)中，結(jié)果顯示，0.6mM一組在重組胚的卵裂率及囊胚發(fā)育率方面均顯著高于其它濃度組（P<0.05），所以確定0.6mM是單獨(dú)

3、使用NAC時(shí)最適合于延邊黃牛體細(xì)胞克隆胚胎體外發(fā)育的最佳濃度。
　　2.在延邊黃牛體細(xì)胞克隆胚胎體外培養(yǎng)液中分別添加不同濃度的β-巰基乙醇（β-Mercaptoethanol，β-ME）對(duì)延邊黃牛體細(xì)胞克隆胚胎體外發(fā)育效率影響的試驗(yàn)中，添加50μM一組在重組胚的卵裂率及囊胚發(fā)育率方面均顯著高于其它濃度組（P<0.05），所以確定50μM是單獨(dú)使用β-ME時(shí)最適合于延邊黃牛體細(xì)胞克隆胚胎體外發(fā)育的最佳濃度。
　　3.在延邊黃牛

4、體細(xì)胞克隆胚胎體外培養(yǎng)液中分別添加不同濃度的乙二胺四乙酸二鈉（EDTA Disodium Salt，EDTA-2Na）對(duì)延邊黃牛體細(xì)胞克隆胚胎體外發(fā)育效率影響的試驗(yàn)中，添加50μM一組在卵裂率上高于其他三組，但并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，在重組胚的囊胚發(fā)育率方面顯著高于其它濃度組（P<0.05），所以確定50μM是單獨(dú)使用EDTA-2Na時(shí)最適合于延邊黃牛體細(xì)胞克隆胚胎體外發(fā)育的最佳濃度。
　　4.在延邊黃牛體細(xì)胞克隆胚胎體外培養(yǎng)液中分別添加

5、不同濃度的檸檬酸鈉（Sodium Citrate）對(duì)延邊黃牛體細(xì)胞克隆胚胎體外發(fā)育效率影響的試驗(yàn)中，添加0.6mM一組在重組胚的卵裂率及囊胚發(fā)育率方面均顯著高于0mM和0.3mM組（P<0.05），與1.2mM組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，綜合分析，確定0.6mM是單獨(dú)使用檸檬酸鈉時(shí)最適合于延邊黃牛體細(xì)胞克隆胚胎體外發(fā)育的最佳濃度。
　　5.在延邊黃牛體細(xì)胞克隆胚胎體外培養(yǎng)液中分別添加不同濃度的維生素 E（Alpha Tocopherol，VE

6、）對(duì)延邊黃牛體細(xì)胞克隆胚胎體外發(fā)育效率影響的試驗(yàn)中，添加100μM一組在重組胚的卵裂率及囊胚發(fā)育率方面均顯著高于其它濃度組（P<0.05），所以確定100μM是單獨(dú)使用VE時(shí)最適合于延邊黃牛體細(xì)胞克隆胚胎體外發(fā)育的最佳濃度。
　　6.在延邊黃牛體細(xì)胞克隆胚胎體外培養(yǎng)液中分別添加不同濃度的表沒(méi)食子兒茶素沒(méi)食子酸酯（Epigallocatechin-3-gallate，EGCG）對(duì)延邊黃牛體細(xì)胞克隆胚胎體外發(fā)育效率影響的試驗(yàn)中，在卵裂

7、率上，7.5μM組和15μM組顯著高于加0μM組（P<0.05），在囊胚發(fā)育率上，15μM組顯著高于0μM組和30μM組（P<0.05），雖然與7.5μM組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但綜合分析，我們認(rèn)為15μM是單獨(dú)使用EGCG時(shí)最適合于延邊黃牛體細(xì)胞克隆胚胎體外發(fā)育的最佳濃度。
　　7.在延邊黃牛體細(xì)胞克隆胚胎體外培養(yǎng)液中分別添加不同濃度的亞硒酸鈉（Sodium Selenite，SS）對(duì)延邊黃牛體細(xì)胞克隆胚胎體外發(fā)育效率影響的試驗(yàn)中，2.