不同培養(yǎng)體系對(duì)延邊黃牛體細(xì)胞克隆胚胎體外發(fā)育的影響.pdf

1、延邊黃牛以其獨(dú)特的肉用品質(zhì)，在國際市場享有很高的聲譽(yù)，但是延邊黃牛存在生長速度慢，產(chǎn)肉性能低，良種覆蓋率低等缺點(diǎn)，主要原因是受技術(shù)的發(fā)展、體制和經(jīng)費(fèi)的制約，在改良和選育過程中科技貢獻(xiàn)率低，成果轉(zhuǎn)化慢，育種周期長。近年來，體細(xì)胞克隆技術(shù)得到迅速發(fā)展，用于育種改良時(shí)與傳統(tǒng)方式相比，可使育種周期縮短幾十年，如再配合過去的繁育技術(shù)體系，可使良種母牛的繁殖潛力大幅度提高，這對(duì)加快中國延邊黃牛資源保護(hù)和開發(fā)進(jìn)程，建設(shè)中國特色延邊黃牛肉牛產(chǎn)業(yè)具有重大

2、意義。 本研究以新鮮的顆粒細(xì)胞作為供核細(xì)胞，以延邊黃牛M Ⅱ期去核的卵母細(xì)胞作為受體，點(diǎn)壓法將供體顆粒細(xì)胞注入到卵母細(xì)胞卵黃周隙中，0.3M甘露醇融合液中施加20μs時(shí)長的一次電脈沖刺激使之融合，5μM的離子霉素預(yù)激活5min，然后移入2mM的6-DMAP中激活培養(yǎng)4h，按實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)分組移入培養(yǎng)液中，定期更換培養(yǎng)液并觀察胚胎發(fā)育情況，結(jié)果以卵裂率、4-6細(xì)胞發(fā)育率和8-16細(xì)胞發(fā)育率評(píng)價(jià)。結(jié)果如下： (1)使用CRlaa和

3、TCM-199培養(yǎng)液培養(yǎng)時(shí)，4-6細(xì)胞發(fā)育率和8-16細(xì)胞發(fā)育率分別為63.6％、57.9％和27.1％、28.2％，顯著高于mSOF培養(yǎng)液培養(yǎng)的43.2％和17.3％。 (2)在CRlaa培養(yǎng)液中添加1mM的GSH時(shí)，卵裂率、4-6細(xì)胞發(fā)育率和8-16細(xì)胞發(fā)育率分別為61.0％、66.0％和45.2％，要優(yōu)于添加2mM和3mM組。 (3)72h之前不添加血清時(shí)4-6細(xì)胞發(fā)育率比對(duì)照組(CRlaa)高(69.8％vs 5

4、5.6％)，8-16細(xì)胞發(fā)育率卻比對(duì)照組低(19.9％vs 31.0％)，差異均顯著(P<0.05)；培養(yǎng)第五天添加葡萄糖時(shí)能顯著提高胚胎8-16細(xì)胞發(fā)育率(40.5 vs 31.0％)。 (4)以CRlaa和TCM-199為基礎(chǔ)液時(shí)，輸卵管上皮細(xì)胞和顆粒細(xì)胞共培養(yǎng)在卵裂率、胚胎4-6細(xì)胞發(fā)育率和8-16細(xì)胞發(fā)育率方面都有顯著提高(P<0.05)。使用SPSS14.0軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)行方差分析并多重比較后，綜合考慮實(shí)驗(yàn)結(jié)果和方便操作