不同培養(yǎng)條件對牛體外受精早期胚胎體外發(fā)育的影響研究.pdf

1、本研究利用屠宰黃牛卵巢，對卵巢表面2～8mm卵泡卵母細(xì)胞經(jīng)體外成熟、體外受精后的早期胚胎，與不同的體細(xì)胞共培養(yǎng)及在有不同添加物的胚胎培養(yǎng)液中的后續(xù)發(fā)育進(jìn)行了研究，并探討了其影響因素，以期篩選出最佳的體外培養(yǎng)條件，結(jié)果顯示： 1.牛體外受精后早期胚胎與顆粒細(xì)胞和輸卵管上皮細(xì)胞共培養(yǎng)有助于胚胎的體外發(fā)育。盡管卵裂率與對照組均無顯著差異(P＞0.05)，但桑葚胚率均顯著高于對照組(P＜0.05)；與輸卵管上皮細(xì)胞共培養(yǎng)組的囊胚率顯著高

2、于對照組(P＞＜0.05)，而與顆粒細(xì)胞共培養(yǎng)組的囊胚率與對照組無顯著差異(P＞0.05)；試驗(yàn)組的孵化囊胚率(14.2％和17.3％)均極顯著高于對照組(0％)(P＜0.01)；試驗(yàn)組之間的卵裂、桑椹胚、囊胚率均未出現(xiàn)差異(P＞0.05)。 2.比較了牛體外受精胚胎基礎(chǔ)培養(yǎng)液中添加5％和10％FBS后，對胚胎后續(xù)發(fā)育的影響，結(jié)果顯示添加10％FBS組的卵裂率顯著高于不添加血清的對照組(P＞＜0.05)，但與添加5％FBS組的卵

3、裂率差異不顯著(P＞0.05)，甚至以添加5％FBS組較高；囊胚率顯著高于對照組和5％FBS添加組(P＜0.05)；對照組未出現(xiàn)孵化囊胚，試驗(yàn)組均出現(xiàn)孵化囊胚，且10％添加組(14.2％)顯著高于5％添加組(3.7％)(P＜0.05)，這表明胎FBS對牛早期胚胎發(fā)育有促進(jìn)作用，以10％添加量為最佳。 3.探討了添加不同濃度的牛磺酸對牛IVF后胚胎桑椹胚率、囊胚率和孵化囊胚率的影響并比較了胚胎的不同發(fā)育階段添加?；撬釋ε咛サ暮罄m(xù)發(fā)

4、育情況?；A(chǔ)培養(yǎng)液(對照組)中分別添加7和14mM的?；撬?試驗(yàn)組)后，其卵裂率、桑椹胚率分別為90.0％、89.6％和48.1％、47.4％均與對照組無顯著差異(P＞0.05)；添加7mM?；撬峤M的囊胚率(26.4％)顯著高于對照組(21.0％)和添加14mM組(22.3％)(P＜0.05)；試驗(yàn)組與對照組孵化囊胚率分別為21.8％、18.7％和14.2％，差異不顯著(P＞0.05)，而囊胚總細(xì)胞數(shù)顯著高于對照組(P＜0.05)。IV

5、F后2細(xì)胞、4～8細(xì)胞及8～16細(xì)胞期，在基礎(chǔ)培養(yǎng)液中分別添加7mM的?；撬釙r，桑椹胚率分別為48.7％、57.1％、52.0％，囊胚率分別為25.1％、30.7％、27.9％，孵化囊胚率分別為25.9％、28.6％、25.0％；而添加14mM?；撬峤M時，桑椹胚率分別為50.4％、56.4％、55.4％，囊胚率分別為26.5％、31.3％、27.7％，孵化囊胚率分別為27.5％、31.1％、29.9％。結(jié)果表明，當(dāng)體外發(fā)育培養(yǎng)液中添加牛

6、磺酸可顯著提高桑椹胚率和囊胚率(P＜0.05)，并且在4～8細(xì)胞期添加?；撬嶙顬楹线m。 4.牛IVF后早期胚胎體外發(fā)育時向其基礎(chǔ)培養(yǎng)液(對照組)中加入50和100μM的β-ME(試驗(yàn)組)，其桑椹胚率分別為48.1％和47.4％，囊胚率分別為26.4％和22.3％，均極顯著高于對照組的桑葚胚和囊胚率(43.2％、21.0％)(P＜0.01)；孵化囊胚率分別為16.2％和17.0％與對照組(14.2％)差異不顯著(P＞0.05)；囊

7、胚總細(xì)胞數(shù)也均無顯著差異(P＞0.05)。IVF后2細(xì)胞、4～8細(xì)胞及8～16細(xì)胞期，在基礎(chǔ)培養(yǎng)液中分別添加50μM的β-ME時，桑椹胚率分別為52.2％、58.2％、54.8％，囊胚率分別為25.8％、31.8％、29.3％，孵化囊胚率分別為16.2％、16.0％、17.4％，桑葚胚率、囊胚率均與對照組(43.2％、21.0％)差異顯著(P＜0.05)，而孵化囊胚率與對照組(14.2％)差異不顯著(P＞0.05)；而添加100μM的β