IL-22在大鼠嗜鉻瘤細(xì)胞PC12中生物學(xué)作用的研究.pdf

1、白細(xì)胞介素22(Interleukin-22，IL-22)屬于IL-10細(xì)胞因子家族，由特殊的免疫細(xì)胞（包括Th22、Th1、Th17、NK、NKT細(xì)胞以及淋巴組織誘導(dǎo)細(xì)胞）產(chǎn)生。IL-22通過配體結(jié)合鏈IL-22R1和IL-10R2組成的受體復(fù)合物啟動信號通路，其中IL-22R1是IL-22的特異性受體。IL-22的靶細(xì)胞包括來自皮膚、肝臟和腎臟以及某些呼吸道和胃腸道系統(tǒng)的組織細(xì)胞，不包括造血系統(tǒng)的細(xì)胞。IL-22主要介導(dǎo)白細(xì)胞和上皮

2、細(xì)胞之間的相互作用。但也有研究發(fā)現(xiàn)，在小鼠的大腦中可檢測到IL-22的表達(dá)，并且大鼠嗜鉻瘤細(xì)胞PC12可對IL-22的刺激產(chǎn)生反應(yīng)。但目前尚不清楚IL-22對神經(jīng)細(xì)胞的生物學(xué)作用。本試驗(yàn)研究IL-22在大鼠嗜鉻瘤細(xì)胞PC12中的生物學(xué)作用。取得了以下主要研究結(jié)果:
　　 1、在RT-PCR檢測到PC12細(xì)胞表面有IL-22R1表達(dá)的預(yù)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，以100ng/mlIL-22刺激PC12細(xì)胞不同的時間，采用westernblot

3、方法檢測相關(guān)信號通路蛋白的活化的情況。結(jié)果顯示IL-22激活了Stat3酪氨酸的磷酸化，對Stat3絲氨酸的磷酸化沒有明顯的影響。此外，IL-22活化p38MAPK通路，抑制Erk/MAPK通路的活化，沒有檢測到JNK的活化。同時還觀察到IL-22能促進(jìn)Akt通路的活化。
　　 2、PC12細(xì)胞饑餓48h后，60-70％細(xì)胞發(fā)生死亡。本研究在饑餓細(xì)胞的同時加入了不同濃度的IL-22，采用MTT法統(tǒng)計細(xì)胞的相對數(shù)目。結(jié)果顯示50n

4、g/ml、100ng/ml的IL-22可以保護(hù)饑餓的PC12細(xì)胞存活。通過MTT法和westernblot法檢測在各通路的抑制劑的作用下檢測IL-22對饑餓PC12細(xì)胞存活的保護(hù)作用是否被抑制，發(fā)現(xiàn)Jak1/Stat3和Akt途徑在保護(hù)饑餓PC12細(xì)胞的存活的過程中發(fā)揮作用，而p38MAPK通路在此過程中不發(fā)揮作用。在饑餓細(xì)胞48h的同時，加入100ng/mlIL-22，發(fā)現(xiàn)IL-22可增強(qiáng)細(xì)胞的自噬。
　　 3、MTT法結(jié)果表

5、明IL-22不促進(jìn)PC12細(xì)胞的增殖。無論是統(tǒng)計神經(jīng)突觸的數(shù)目，還是檢測生長相關(guān)蛋白GAP-43的表達(dá)情況，均發(fā)現(xiàn)IL-22對PC12細(xì)胞的分化無影響。但I(xiàn)L-22可能下調(diào)NGF引起的PC12細(xì)胞突觸的生長和細(xì)胞分化相關(guān)蛋白(GAP-43)的表達(dá)。
　　 4、Mpp+（1-甲基4苯基吡啶離子）是MPTP(1-甲基-4-苯基-1,2，3，6-四氫吡啶)的代謝產(chǎn)物，它會導(dǎo)致動物和人類帕金森病樣綜合征與多巴胺能神經(jīng)細(xì)胞的損失，因此可用

6、于體外誘導(dǎo)帕金森綜合癥(PD)的PC12細(xì)胞模型。且分化的細(xì)胞較未分化的細(xì)胞對Mpp+更敏感，但Mpp+對低分化的細(xì)胞仍具有毒性。采用MTT法研究發(fā)現(xiàn)IL-22對Mpp+對未分化的PC12細(xì)胞的細(xì)胞毒性作用無影響，但對分化的細(xì)胞可防止Mpp+誘導(dǎo)的神經(jīng)退化。
　　 以上結(jié)果表明，IL4-22可影響PC12細(xì)胞相關(guān)通路的活化，并且通過Jak1/Stat3和AKT通路保護(hù)饑餓的PC12細(xì)胞存活。另外還發(fā)現(xiàn)，IL-22可能在神經(jīng)生物學(xué)