移植物抗宿主病相關血清標志物聯(lián)合應用預警和診斷價值的研究.pdf

1、目的:急性移植物抗宿主病(acute graft-versus-host disease，aGVHD)是異基因造血干細胞移植后并發(fā)癥之一，發(fā)病率在10～50％，致死率高達75％，嚴重影響了移植效果和術后生存率。數(shù)十年來，aGVHD的臨床診斷主要根據(jù)累及器官損傷程度的判斷和組織活檢結果，容易造成病情誤判和延誤。目前，能夠在臨床上廣泛應用的無創(chuàng)、快速和準確診斷和早期診斷尤為缺乏。本研究旨在探索aGVHD的血清生物標志物，例如細胞因子、生化指

2、標、microRNA和血清多肽對疾病發(fā)生發(fā)展的臨床意義，從而找到無創(chuàng)、快速和準確預警和診斷aGVHD的方法或生物學模型。
　　方法:我們定點連續(xù)收集了2012-2014年在解放軍總醫(yī)院血液科接受異體造血干細胞移植發(fā)生aGVHD和未發(fā)生aGVHD(non-GVHD)共45例患者移植全過程動態(tài)血清。在第一部分，我們檢測了移植過程中發(fā)生aGVHD和未發(fā)生aGVHD(non-GVHD)患者血清中8種細胞因子（IL-8，IL-10，CD40

3、L，TNF-α，MCP-1，MIP-1α，RANTES和LIGHT)和19種生化指標的動態(tài)變化，尋找各指標兩組間差異和動態(tài)差異。第二部分，我們使用MicroRNA芯片檢測了發(fā)生aGVHD患者在+7天和發(fā)病時，以及未發(fā)生aGVHD患者在+7天和+28天的血清MicroRNA水平，尋找MicroRNA對aGVHD發(fā)生的臨床意義，并使用實時定量PCR技術對其進行了驗證。第三部分，我們使用基質輔助解析電離飛行時間質譜技術(MALDI-TOF-M

4、S)檢測發(fā)生aGVHD和未發(fā)生aGVHD患者移植過程中血清多肽譜的差異，探索aGVHD發(fā)生發(fā)展中血清多肽的變化。第四部分，我們聯(lián)合前三部分預選出的四種血清參數(shù)，嘗試建立多種參數(shù)聯(lián)合預警aGVHD的模型。
　　結果:第一部分，我們的數(shù)據(jù)顯示aGVHD患者和non-GVHD患者血清細胞因子和生化指標水平有顯著差異（雙側檢驗p＜0.05），通過二元Logistic回歸，移植后+7天和+14天時血清細胞因子和生化指標建立的模型，能夠提前預

5、測Ⅱ-Ⅳ度aGVHD的發(fā)生，陽性預測率和陰性預測率都超過90％。第二部分，MicroRNA芯片結果顯示aGVHD患者移植后+7天miR-411水平顯著降低，通過實驗組(n=18)芯片篩選和驗證組(n=38) Real-time PCR的驗證，+7天時建立的aGVHD預警模型包括2種microRNA(miR-26b和miR-374a)，ROC曲線下面積為0.931，aGVHD發(fā)生時建立的診斷模型包括3種microRNA(miR-28-5p

6、, miR-489和miR-671-3p)，ROC曲線下面積為0.961。第三部分，質譜數(shù)據(jù)顯示aGVHD和non-GVHD患者血清多肽譜有所不同，通過差異峰建立aGVHD(Ⅰ～Ⅳ)和重度aGVHD(Ⅱ～Ⅳ)預警模型，對aGVHD(Ⅰ～Ⅳ)的預警模型準確度移植前為77.8％，移植后為90.6％;對重度aGVHD(Ⅱ～Ⅳ)的預警模型準確度移植前為準確度88.57％，移植后為92.13％。第四部分，我們使用前面三部分預選出的四種血清參數(shù)在+

7、7天時建立aGVHD預警模型，miR-26b和血清多肽入選方程，模型敏感為94.70％，特異性為89.50％，準確率為92.10％。
　　結論:aGVHD發(fā)生發(fā)展影響著血清中細胞因子、生化指標、microRNA和血清多肽的變化，使其成為aGVHD相關血清生物標記物。aGVHD發(fā)生前血清各參數(shù)就已發(fā)生變化，使得預警aGVHD成為可能。通過對aGVHD患者和non-GVHD患者血清中這些指標差異比較和變化監(jiān)測，我們建立的模型能夠提前1