骨髓間質(zhì)干細胞治療移植物抗宿主病的應(yīng)用研究.pdf

1、骨髓間質(zhì)干細胞(mesenchymal stem cells，MSCs)是廣泛存在于人體各組織中的一種成體干細胞，其中骨髓中含量最為豐富，具有多向分化潛能，不但可以分化為多種中胚層來源的細胞，如成骨細胞、脂肪細胞和成軟骨細胞，還可以分化為其他胚層來源的細胞，如神經(jīng)細胞等。另一方面，MSCs還具有免疫調(diào)節(jié)的功能，體外培養(yǎng)實驗證明MSCs能夠抑制植物凝集素(PHA)刺激下的T淋巴細胞增殖，能在宿主體內(nèi)存活并誘導(dǎo)免疫耐受，這些免疫學特點使得其

2、在移植物抗宿主病(GVHD)及系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)等自身免疫性疾病方面具用重要的應(yīng)用價值。由于MSCs來源廣泛、易于分離培養(yǎng)、能長期存活、無排斥反應(yīng)和易于基因轉(zhuǎn)染等特點，其已成為細胞治療、基因治療和組織工程的常用細胞，已經(jīng)廣泛應(yīng)用于心血管、神經(jīng)系統(tǒng)、呼吸和創(chuàng)傷等方面的基礎(chǔ)研究，部分成果已用于臨床。本實驗室前期研究顯示MSCs具有推遲大鼠急性移植物抗宿主發(fā)病時間延長存活時間的作用，因此，本實驗在此基礎(chǔ)上擬探討人MSCs在治療移植物抗宿

3、主病的臨床作用。但是，由于對MSCs體外大量培養(yǎng)擴增尚無有效的方法和標準的操作程序，以及異種抗原抗體或微生物的污染尚無嚴密的監(jiān)測標準和手段等問題，使得目前MsCs的臨床推廣應(yīng)用還面臨許多問題。 因此，為了加快MSCs臨床應(yīng)用的步伐，本研究首先探討了治療用MSCs體外分離、培養(yǎng)擴增的方法及質(zhì)量控制監(jiān)測標準，并在此基礎(chǔ)上將其應(yīng)用臨床治療，探討其在移植物抗宿主病，系統(tǒng)性紅斑狼瘡的治療作用。本論文由三部分組成： 第一部分：體外分

4、離和擴增人骨髓MSCs，并分析其基本的生物學特征，包括其形態(tài)特征、增殖特征、細胞表型和多向分化潛能；同時探討堿性成纖維細胞生長因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)對人MSCs增殖能力的影響。 第二部分：骨髓間質(zhì)干細胞的質(zhì)量控制：包括細胞污染的預(yù)防，細胞培養(yǎng)過程中細菌、真菌、支原體及病毒的檢測及輸前細胞懸液中牛血清的去除，并對其存活率、純度、均一性等進行鑒定。 第三部分：骨髓間質(zhì)干