乳酸片球菌素抑菌機(jī)理研究.pdf

1、乳酸片球菌素是由乳酸片球菌通過核糖體合成機(jī)制產(chǎn)生的具有抗菌活性的蛋白質(zhì)，對(duì)單核細(xì)胞增多癥李氏桿菌，植物乳桿菌等多種革蘭氏陽性菌具有明顯的抑制作用。本實(shí)驗(yàn)從乳酸片球菌素的二級(jí)結(jié)構(gòu)，吸附特性，以及作用模式三方面探索了其抑菌的機(jī)制。
　　 通過圓二色光譜法和蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測與模擬研究，發(fā)現(xiàn)乳酸片球菌素的α-螺旋含量約為6.8％，β-折疊含量約為20％，轉(zhuǎn)角所占比例為20％。當(dāng)乳酸片球菌素的α-螺旋含量增加，β-折疊，轉(zhuǎn)角含量降低時(shí)，

2、細(xì)菌素活性隨之降低，在pH6.0的低鹽溶液中，乳酸片球菌素的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，此時(shí)抑菌活性最高；在pH12.0或者高濃度的鹽溶液中，乳酸片球菌素α-螺旋含量增加至58％，β-折疊結(jié)構(gòu)消失，細(xì)菌素活性喪失。乳酸片球菌素中的二硫鍵對(duì)維持細(xì)菌素的活性和穩(wěn)定性有著至關(guān)重要的作用。
　　 以單核細(xì)胞增多癥李氏桿菌CVCC1595為指示菌，通過對(duì)乳酸片球菌素吸附率的研究，發(fā)現(xiàn)乳酸片球菌素的吸附受鹽濃度、pH和細(xì)胞膜的成分影響顯著。NaCI和磷酸鹽濃

3、度越高，吸附作用越小，在400 mmol/L NaCI溶液中，乳酸片球菌素對(duì)菌體的吸附率為0；在pH6.0吸附率最高(100％)，pH2.0和8.0的吸附率為24.4％，pH12.0時(shí)乳酸片球菌素在菌體上無吸附。溫度對(duì)吸附影響很小，在100℃時(shí)吸附率比室溫時(shí)下降了1.56％；時(shí)間對(duì)吸附?jīng)]有影響。
　　 以108 cfu/ml的單核細(xì)胞增多癥李氏桿菌CVCC1595和植物乳桿菌CICC6043為指示菌，分別與不同量的乳酸片球菌素作

4、用不同時(shí)間后，發(fā)現(xiàn)乳酸片球菌素造成指示菌胞內(nèi)紫外吸收物質(zhì)的溶出，溶出物不與細(xì)菌素作用量和作用時(shí)間成正相關(guān)。
　　 乳酸片球菌素造成敏感菌胞內(nèi)ATP的泄漏，同時(shí)還導(dǎo)致質(zhì)子動(dòng)力勢(ProtonMotive Force)的耗散，PMF的喪失導(dǎo)致細(xì)胞不能合成能量物質(zhì)，細(xì)胞由于能量衰竭而死。
　　 乳酸片球菌素的作用靶點(diǎn)是細(xì)胞膜，首先由靜電引力而吸附于膜上，然后由于疏水相互作用而插入細(xì)胞膜，最后在細(xì)胞膜上形成孔洞，使胞內(nèi)物質(zhì)溶出，