乳酸鏈球菌菌素治療奶牛隱性乳腺炎的研究.pdf

1、本論文首先對(duì)某奶牛場(chǎng)隱性乳腺炎的病菌進(jìn)行調(diào)查，然后研究了Nisin對(duì)奶牛乳腺的刺激性、對(duì)奶牛隱性乳腺炎尤其是由金黃色葡萄球菌引起病例的治療效果。
　　 1.杭州近郊某奶牛場(chǎng)隱性乳腺炎主要病原菌的調(diào)查
　　 為了解杭州近郊某奶牛場(chǎng)奶牛隱性乳腺炎的主要病原菌，首先用杭州乳腺炎快速診斷試劑對(duì)該牧場(chǎng)的兩個(gè)牛棚進(jìn)行隱性乳腺炎檢測(cè)，采集檢測(cè)結(jié)果為“+++”強(qiáng)陽(yáng)性乳區(qū)奶樣89個(gè)進(jìn)行細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)，并對(duì)分離的主要病原菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn)以及牛奶中

2、SCC和NAGase酶活性的測(cè)定。結(jié)果顯示：在該牧場(chǎng)分離的奶牛隱性乳腺炎的主要病原菌為金黃色葡萄球菌、無乳鏈球菌和凝固酶陰性葡萄球菌。金黃色葡萄球菌對(duì)青霉素G、氨芐西林和苯唑青霉素均有較高的耐藥率；無乳鏈球菌對(duì)以上常規(guī)的抗生素保持著較高的敏感性；而凝固酶陰性葡萄球菌對(duì)青霉素G、氨芐西林、苯唑青霉素和鏈霉素均有較高的耐藥率。因此，該場(chǎng)引起奶牛隱性乳腺炎的主要致病菌為金黃色葡萄球菌、無乳鏈球菌以及凝固酶陰性葡萄球菌，葡萄球菌對(duì)青霉素類藥物已

3、經(jīng)產(chǎn)生耐藥性。
　　 2.Nisin Z對(duì)奶牛乳腺的刺激性
　　 Nisin作為治療奶牛隱性乳腺炎的藥物在應(yīng)用之前，必須要對(duì)其進(jìn)行藥物刺激性試驗(yàn)，以便篩選出治療奶牛隱性乳腺炎的最佳劑量。本試驗(yàn)選擇1頭處于泌乳中期且四個(gè)乳區(qū)均健康的荷斯坦奶牛，分別將三個(gè)不同的劑量組的Nisin制劑于擠奶結(jié)束后分別灌注于右前、右后以及左后乳區(qū)，左前乳區(qū)灌注250mL生理鹽水作為對(duì)照組，然后在灌注結(jié)束后24h、48h、72h、96h以及1周時(shí)

4、進(jìn)行SCC及NAGase酶活性的檢測(cè)。
　　 試驗(yàn)結(jié)果表明，除了5.0×106IU劑量組有明顯的臨床癥狀外，其他劑量組與對(duì)照組均無明顯的臨床癥狀。灌注三種不同劑量的藥物后，三個(gè)灌注乳區(qū)牛奶體細(xì)胞數(shù)在24h時(shí)均明顯升高，但是24h后又逐漸下降，至1周時(shí)恢復(fù)正常水平，而對(duì)照組乳區(qū)則無顯著變化。牛奶中NAGase酶活性檢測(cè)結(jié)果表明，灌注藥物后24h后，兩個(gè)高劑量組NAGase酶活性均升高，然后在24～72h保持穩(wěn)定，隨后NAGase酶

5、活性恢復(fù)至正常水平；而125×106IU劑量組與對(duì)照組在灌注后24h、48h與72h時(shí)，NAGase酶活性則略微升高，隨后便恢復(fù)至正常水平。上述結(jié)果表明，2.5×106IU與1.25×106IU對(duì)奶牛乳腺的刺激性最小，結(jié)合前期Nisin乳房灌注劑治療奶牛隱性乳腺炎的抑菌效果，選擇2.5×106IU作為治療奶牛隱性乳腺炎的治療劑量。
　　 3.Nisin Z乳房灌注劑對(duì)奶牛隱性乳腺炎治療效果
　　 90頭泌乳中期其患隱性乳

6、腺炎的荷斯坦奶牛，被隨機(jī)分成試驗(yàn)組，對(duì)照組。試驗(yàn)組奶牛乳腺內(nèi)灌注Nisin乳房灌注劑，每天一次，連續(xù)三天，對(duì)照組則按照牧場(chǎng)常規(guī)不采取治療。通過檢測(cè)治療前后HMT變化、細(xì)菌學(xué)檢查、牛奶體細(xì)胞計(jì)數(shù)、以及牛奶中NAGase酶活性變化，確定Nisin乳房灌注劑對(duì)奶牛隱性乳腺炎的治療效果。
　　 細(xì)菌學(xué)檢查結(jié)果可以看出，患病乳區(qū)分離的主要病原菌為金黃色葡萄球菌、凝固酶陰性葡萄球菌和無乳鏈球菌；經(jīng)過Nisin治療后第2周后，試驗(yàn)組與對(duì)照組細(xì)

7、菌學(xué)轉(zhuǎn)陰率分別為65.2％和15.9％，統(tǒng)計(jì)學(xué)差異極顯著；其中各試驗(yàn)組與對(duì)照組主要致病菌在治療后第2周其細(xì)菌學(xué)轉(zhuǎn)陰率分別為：金黃色葡萄球菌為50.0％和18.2％，無乳鏈球菌為90.9％和1.40％，凝固酶陰性葡萄球菌為58.8％和27.3％，兩組細(xì)菌學(xué)轉(zhuǎn)陰率同期比較，金黃色葡萄球菌與凝固酶陰性葡萄球菌均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，而無乳鏈球菌則差異極顯著；NAGase酶活性檢測(cè)結(jié)果表明，試驗(yàn)組在經(jīng)Nisin乳房灌注劑治療第1、2周后，牛奶中在NAG

8、ase酶活性均顯著減低，而對(duì)照組則無顯著差異；牛奶體細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果顯示，試驗(yàn)組在治療后第1、2周牛奶中體細(xì)胞≤5.0×105個(gè)/mL的百分比為41.3％和32.6％，而對(duì)照組則分別為18.2％和9.1％，兩組同期比較差異均極顯著。因此，Nisin乳房灌注劑治療奶牛隱性乳腺炎具有良好的效果。
　　 4.Nisin Z治療奶牛隱性乳腺炎降低桶奶體細(xì)胞含量
　　 本試驗(yàn)在安徽試驗(yàn)基地選擇兩個(gè)牛棚，其中試驗(yàn)組牛棚含85頭，對(duì)照組牛

9、棚含90頭，選擇的奶牛均為處于泌乳中期的荷斯坦奶牛。3～7月對(duì)兩個(gè)牛棚進(jìn)行如下內(nèi)容檢查：桶奶體細(xì)胞數(shù)、桶奶乳成份、桶奶細(xì)菌數(shù)。8～12月用Nisin乳房灌注劑對(duì)試驗(yàn)組中隱性乳腺炎病例進(jìn)行治療，每天一次，連續(xù)三天，對(duì)照組則按照牧場(chǎng)常規(guī)不采取治療。然后每個(gè)月分別檢測(cè)桶奶體細(xì)胞數(shù)、桶奶細(xì)菌數(shù)、桶奶中乳成份以及利用ECLIPSE50檢測(cè)桶奶中Nisin Z的殘留，以確定Nisin乳房灌注劑是否能夠降低桶奶體細(xì)胞數(shù)。試驗(yàn)組隱性乳腺炎病例采取治療措

10、施后，桶奶體細(xì)胞數(shù)8～12月份均顯著低于對(duì)照組；桶奶細(xì)菌數(shù)顯著低于對(duì)照組；桶奶中蛋白質(zhì)、脂肪、乳糖與非脂質(zhì)固體的含量均高于對(duì)照組。當(dāng)試驗(yàn)牛群用Nisin灌注劑同時(shí)治療隱性乳房炎病例少于10個(gè)時(shí)，桶奶ECLIPSE50法試驗(yàn)為陰性。因此，Nisin乳房灌注劑對(duì)牛群中奶牛隱性乳腺炎病例治療后能夠有效的降低桶奶體細(xì)胞數(shù)。
　　 5.Nisin Z治療奶牛隱性型乳腺炎后在牛奶中的殘留
　　 本試驗(yàn)通過選擇3頭泌乳中期患隱性乳腺炎

11、的奶牛，用Nisin乳房灌注劑治療患病乳區(qū)，每天一次，連續(xù)三天；未治療的相鄰乳區(qū)作為對(duì)照。治療結(jié)束后24h、48h、72h與96h后利用國(guó)標(biāo)法檢測(cè)治療乳區(qū)與對(duì)照乳區(qū)的Nisin Z殘留。結(jié)果表明，Nisin灌注劑治療后24h牛奶中Nisin Z的殘留量為75.81±36.50 IU/mL，遠(yuǎn)低于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的乳制品中Nisin的最大允許添加量，而相鄰乳區(qū)的混合奶樣，則無Nisin檢出。發(fā)酵培養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)果表明，在治療后24h采集治療乳區(qū)牛奶

12、經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)會(huì)被抑制，但24h后檢測(cè)均沒有抑制發(fā)酵；而對(duì)照乳區(qū)采集的混合奶樣經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)均不會(huì)被抑制。本試驗(yàn)說明Nisin治療奶牛隱性乳腺炎后24h，治療乳區(qū)牛奶中的Nisin Z的殘留量遠(yuǎn)低于國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，但灌注乳區(qū)的牛奶在治療后24h會(huì)抑制發(fā)酵培養(yǎng)。
　　 6.Nisin Z在不同炎癥程度牛奶中的降解
　　 選擇牛奶SCC在0～2.0×105個(gè)/mL的正常奶牛、SCC在1.0～2.0×106個(gè)/mL的隱性乳腺炎奶牛以及臨床型

13、乳腺炎奶牛各3頭，然后分別采集正常乳區(qū)與患病乳區(qū)的牛奶各10mL，首先測(cè)定了三種不同炎癥程度牛奶中NAGase酶的活性，然后在牛奶中加入Nisin，在37℃培養(yǎng)。分別檢測(cè)0h、2h、4h、6h與8h后Nisin在牛奶中的殘留量。結(jié)果表明：Nisin在不同牛奶中的降解速度不一，從高到低依次為：正常牛奶、隱性乳腺炎牛奶和臨床型乳腺炎牛奶。隨著時(shí)間的增加，Nisin活性減少。
　　 7.Nisin與金黃色葡萄球菌疫苗聯(lián)合應(yīng)用治療奶牛隱

14、性乳腺炎
　　 選擇處于泌乳中期的荷斯坦奶牛75頭，每頭牛有一個(gè)隱性乳腺炎乳區(qū)。奶牛被隨機(jī)分成三組，Nisin與金黃色葡萄球菌疫苗聯(lián)合治療組，Nisin治療組，對(duì)照組，且每組各25頭。在Nisin與疫苗聯(lián)合治療組中，首先在擠奶結(jié)束后于奶牛乳腺上淋巴結(jié)注射金黃色葡萄球菌疫苗2mL，1周后對(duì)患病乳區(qū)開始灌注Nisin Z制劑，每天一次，連續(xù)三天，灌注結(jié)束后1周第二次在乳腺淋巴結(jié)注射疫苗2mL； Nisin治療組則是每天灌注Nisin

15、 Z制劑一次，連續(xù)三天；對(duì)照組則不采取治療。然后在處理前與治療后第2、4和6周采集樣品，分別檢測(cè)HMT強(qiáng)陽(yáng)性率、牛奶體細(xì)胞數(shù)、NAGase酶活性以及細(xì)菌學(xué)檢查。
　　 兩個(gè)治療組同期比較均均無差異，但與治療前及對(duì)照組比較差異極顯著。兩個(gè)治療組同期比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但是與治療前及對(duì)照比較差異均極顯著。細(xì)菌學(xué)檢查表明，Nisin與金黃色葡萄球菌疫苗治療組、Nisin治療組與對(duì)照組在第2、4和6周的細(xì)菌學(xué)治愈率分別為(68.0％、4

16、4.0％、0)，(72.0％、40.0％、0)和(72.0％、40.0％、0)，而兩個(gè)治療組同期比較，其中第2周比較差異不顯著，第4周和第6周差異均顯著，而與對(duì)照組比較差異均極顯著。對(duì)治療前后牛奶中乳成份的變化進(jìn)行分析可以看出，治療后第2、4和6周牛奶中蛋白質(zhì)、脂肪、乳糖與總固體的含量均呈升高趨勢(shì)，去治療前以及對(duì)照組相比較差異均為顯著，但是兩個(gè)治療組同期比較差異均不顯著。上述試驗(yàn)結(jié)果表明，利用Nisin與金黃色葡萄球菌疫苗聯(lián)合治療奶牛隱

17、性乳腺炎病例，尤其是由金黃色葡萄球菌引起的隱性乳腺炎病例，效果要優(yōu)于單獨(dú)用Nisin治療。
　　 綜上所述，杭州近郊某奶牛場(chǎng)奶牛隱性乳腺炎的主要致病菌為金黃色葡萄球菌、無乳鏈球菌與凝固酶陰性葡萄球菌，且葡萄球類細(xì)菌已經(jīng)對(duì)青霉素類藥物產(chǎn)生耐藥性。Nisin Z制劑對(duì)奶牛乳腺的刺激性試驗(yàn)表明，2.50×106IU適合作為治療奶牛隱性乳腺炎的劑量。利用Nisin乳房灌注劑治療奶牛隱性乳腺炎均有良好的治療效果，而且在治療后24h牛奶中N