乳粉中阪崎腸桿菌標準物質的制備.pdf

1、本試驗研究了乳粉中阪崎腸桿菌標準物質的制備方法。本研究以一級標準物質技術規(guī)范(JJG1006-94)為準則，并且遵照中華共和國出入境檢驗檢疫行業(yè)標準中“奶粉中阪崎腸桿菌檢驗方法--第1部分：分離與計數(shù)方法”的操作規(guī)范來進行本試驗。 由于適合的保護劑對阪崎腸桿菌標準物質的凍干保存很重要，所以本試驗首先設計了一個保護劑試驗米挑選最適合阪崎腸桿菌標準物質凍干保存的保護劑。試驗選擇了三種保護劑進行比較：奶液(20g奶粉+80mL無菌水)

2、；營養(yǎng)肉湯100mL+7.5g葡萄糖：0.1mol/L磷酸鹽緩沖液100ml+L-谷氨酸鈉3g+乳糖5g+聚乙烯吡咯烷酮6g。先將阪崎腸桿菌分別加到三種保護劑中，分裝到安瓿瓶中，預凍后進行冷凍干燥，做生化試驗，然后定期檢測各保護劑的含菌量。結果表明脫脂奶粉對阪崎腸桿菌的保護效果最好。此后，繼續(xù)定期檢測以脫脂奶粉作為保護劑的安瓿瓶中菌量，以檢測其穩(wěn)定性。 接到營養(yǎng)肉湯中的阪崎腸桿菌在過夜培養(yǎng)后，濃度一般在108左右，將其稀釋到10

3、5，并從中取2ml菌液加到奶液(40g脫脂奶粉+160ml無菌水)中，倒入滅菌小瓷盤并在-70℃預凍18-24h，冷凍干燥48-60h，裝到均質袋中并均質器中拍打均勻；從中取10g奶粉+90ml無菌水，測其菌量；而后根據(jù)加菌奶粉的含菌量，用新鮮脫脂奶粉對其進行稀釋，最終將其菌量稀釋到100g脫脂奶粉中僅含有數(shù)百個阪崎腸桿菌，并將這些奶粉分裝成最小單位(10g)，抽真空保存，并對這些制成的標準品進行穩(wěn)定性試驗和均勻性試驗。結果表明穩(wěn)定性和

4、均勻性都符合標準物質的標準，其中兩次均勻性試驗的F值分別為1.759和0.548。 阪崎腸桿菌標準物質制備完成以后，要進行不確定度的評定。影響標準物質制備的不確定度有很多，本試驗對有重要影響的不確定度進行評定，主要是菌落計數(shù)、乳粉中阪崎腸桿菌標準物質定值方法、電子天平的不確定度。阪崎腸桿菌菌落計數(shù)的不確定度為0.06429；標準物質定值方法的不確定度為11.508；電子天平的合成標準不確定度U為1.42518，其擴展不確定度為2