液態(tài)奶中阪崎腸桿菌污染狀況的研究.pdf

1、近年來，世界范圍內(nèi)食品安全事件高發(fā)。越來越多的人開始關(guān)注食品安全問題。
　　 阪崎腸桿菌是1961年首次引起人們關(guān)注的。阪崎腸桿菌(Enterobacter sakazakii)是寄生于人和動(dòng)物腸道的革蘭氏陰性無芽孢的兼性厭氧菌條件性腸道致病菌,具有產(chǎn)生α-葡萄糖苷酶和吐溫80脂酶、不發(fā)酵三梨醇以及無磷酸胺酶活性等生理生化特征,阪崎腸桿菌能引起嚴(yán)重的新生兒腦膜炎、菌血癥、小腸結(jié)腸炎，死亡率高達(dá)20％～50％以上。本研究利用顯色培

2、養(yǎng)基與PCR技術(shù)相結(jié)合的方法建立了一套從液態(tài)奶中快速檢出阪崎腸桿菌的方法，縮短了阪崎腸桿菌的檢測(cè)時(shí)間。
　　 本研究采用改進(jìn)方法進(jìn)行液態(tài)奶中阪崎腸桿菌的分離篩選結(jié)果采用傳統(tǒng)方法從167份的樣品中檢出阪崎腸桿菌3株,檢出率為 1.79 ％;采用改進(jìn)方法從167份的樣品中檢出阪崎腸桿菌4株,檢出率為 2.39 ％。以阪崎腸桿菌的16S rRNA基因?yàn)榘谢颍x擇特異性引物，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，檢測(cè)液態(tài)奶中阪崎腸桿菌。其PCR適宜反應(yīng)體系

3、為：6μL 10×PCR buffer,4 μL dNTPs混合物,2.5 Mg2+μL(25mM),2 μL 10 μmol正向引物,2 μL 10 μmol反向引物，0.25 μL（5 U/μL）Taq,23.25 μL水，總反應(yīng)體系為50μL；其適宜的PCR擴(kuò)增程序?yàn)椋篜CR反應(yīng)采用冷啟動(dòng)，95℃預(yù)變性5 min；變性95℃ 1 min～退火61℃ 0.5 min進(jìn)行35個(gè)循環(huán)。PCR反應(yīng)產(chǎn)物在2％的瓊脂糖凝膠中進(jìn)行電泳，凝膠成像