基于乳鼠的食源性阪崎克羅諾桿菌致病性研究.pdf

1、阪崎克羅諾桿菌（Cronobacter sakazakii）是一種新近發(fā)現(xiàn)的食源性致病菌，能夠以乳粉為載體引起新生兒嚴(yán)重的菌血癥、小腸結(jié)腸炎和腦膜炎。目前，對阪崎克羅諾桿菌的毒力因子與致病性報道不多，對阪崎克羅諾桿菌的致病機理還無定論。
　　本研究通過對前期經(jīng)脈沖場凝膠電泳(Pulse field gel electrophoresis，PFGE)、多位點序列分型(Multilocus sequence typing，MLST)和

2、腸桿菌基因間重復(fù)序列PCR分型(ERIC-PCR)實驗得到的18株代表性阪崎克羅諾桿菌分離株進行乳鼠腸尸比初篩實驗，結(jié)合初篩結(jié)果和菌株來源信息（食品品牌、食品類型、采樣時間和地點等）及MLST分型結(jié)果（不同ST型），確定3株菌用于乳鼠致病性研究。在侵襲乳鼠致病實驗中，通過記錄阪崎克羅諾桿菌感染乳鼠后可能引發(fā)的病癥特征，HE染色確證乳鼠組織病理變化，結(jié)合血液染菌和細(xì)胞因子檢測結(jié)果，證明了阪崎克羅諾桿菌的致病性。通過全基因組重測序，將初篩得

3、到的8株阪崎克羅諾桿菌序列與標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC BAA894序列進行了差異性分析，部分揭示了阪崎克羅諾桿菌的致病機理。主要研究結(jié)果如下:
　　(1)根據(jù)腸尸比實驗，18株阪崎克羅諾桿菌毒力篩選結(jié)果表明菌株12-12(2)、14-15(1)和36-8-1毒力較強，菌株6-16(2)和5-9(1)毒力一般，菌株2-9-1、3-11(1)和7-17(1)毒力較弱。綜合菌株來源信息和MLST分型結(jié)果，選取菌株2-9-1(ST4)、14-15

4、(1)(ST93)和36-8-1(ST4)用于乳鼠侵襲和致病性研究。
　　(2)阪崎克羅諾桿菌對乳鼠的侵襲研究結(jié)果表明:數(shù)量級為109cfu/mL濃度的菌液灌飼乳鼠，在為期7d的飼喂過程中，試驗組和對照組均無乳鼠死亡。乳鼠處死后，試驗組乳鼠的腸、肝、腎、脾和腦組織較空白對照組切片病變特征明顯，毒力最強的菌株36-8-1侵襲乳鼠后的組織病理學(xué)病變尤為明顯。菌株與病變特征的關(guān)系呈現(xiàn)菌株毒力越強則病變特征越發(fā)明顯的趨勢。
　　(3

5、)阪崎克羅諾桿菌侵襲乳鼠后血液分析結(jié)果顯示該菌未進入血液。
　　(4)被侵襲乳鼠血清中TNF-α、IL-1因子及LDH活力檢測結(jié)果表明:試驗菌株與空白對照組相比所測指標(biāo)的含量均呈顯著性增加。毒力較強的ST4型菌株36-8-1侵襲乳鼠后血清中的TNF-α(538.030ng/L)、IL-1（148.895pg/mL）和LDH（2765.32U/L）的含量均為最高，且TNF-α和LDH含量與其它2株實驗菌相比均有顯著差異。
　　

6、(5)阪崎克羅諾桿菌全基因組重測序結(jié)果表明:與阪崎克羅諾桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCCBAA894相比，毒力較弱的菌株7-17(1)和毒力一般的菌株5-9(1)與其他菌株的SNP分析結(jié)果存在明顯的差異，InDel分析中，毒力一般的菌株5-9-1的插入突變、缺失突變及CDS區(qū)InDel最多。毒力較強且為ST4型的36-8-1的插入突變、缺失突變及CDS區(qū)InDel均比較低。
　　綜上所述，阪崎克羅諾桿菌14-15(1)(ST93)和36-8-