20373.阪崎克羅諾桿菌毒力相關(guān)基因的篩選鑒定

1、分類(lèi)號(hào)：Q781密級(jí)：(秘密、機(jī)密、絕密)學(xué)校代碼：10057研究生學(xué)號(hào)：2009841014阪崎克羅諾桿菌毒力相關(guān)基因的篩選鑒定SelectionandIdentifitionofAPutativeVirulence—AssociatedGeneofCronobaterSakazakii專(zhuān)業(yè)名稱(chēng)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師姓名：張燕教授研究生姓名：徐桂香申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：理學(xué)碩士論文提交同期：2012年1月論文課題來(lái)源：國(guó)家自然科學(xué)基金

2、項(xiàng)目(20905058，31071547)學(xué)位授予單位：天津科技大學(xué)摘要阪崎克羅若桿菌(Cronobatersakazakii)是一種條件致病菌，能在人和動(dòng)物的腸道內(nèi)寄生的一種無(wú)芽孢的革蘭氏陰性桿菌。這一致病菌能導(dǎo)致各個(gè)年齡段的人感染，對(duì)新生兒的威脅較大，能引起新生兒腦膜炎，茵血癥和蟛i死性小腸結(jié)腸炎，死亡率達(dá)40％一80％。此外，還能引起成人的局部感染、骨髓炎和菌血癥等。目6訂的研究顯示，阪崎克歲諾桿菌的毒力具有多樣性，乳鼠灌胃實(shí)驗(yàn)表

3、明不同阪崎克歲諾桿菌菌株之問(wèn)的毒力存在明顯差異。雖然阪崎克羅諾桿菌已經(jīng)成為國(guó)內(nèi)外研究的焦點(diǎn)，但是其致病機(jī)制仍然不夠清楚。為了獲得阪崎克歲諾桿菌的毒力相關(guān)基因，本研究利用腹腔注射ICR小鼠對(duì)24株食源性分離株的毒力進(jìn)行了檢測(cè)，根據(jù)致死時(shí)問(wèn)判斷不同菌株的毒力大小。從中選擇毒力最高和毒力最低的菌株，利用抑制性雜交(SSH)篩選其差異基因，結(jié)果共獲得7個(gè)差異片段，測(cè)序后將結(jié)果輸入NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行BlastN與BlastX比對(duì)分析，確定基因性質(zhì)

4、。其中基因papC編碼菌毛亞基轉(zhuǎn)運(yùn)與菌毛組裝干目關(guān)蛋白，可能與阪崎克羅瀟桿菌的致病性有關(guān)。為了進(jìn)。步確認(rèn)papC基因的毒力相關(guān)性，利用基因敲除I司源重組技術(shù)構(gòu)建了papC基因缺失突變株zlpapC，通過(guò)PCR技術(shù)對(duì)缺失突變株進(jìn)行了確認(rèn)。將108CFU野生株與突變株Apap(7分別腹腔注射出生三天的SD乳鼠，汜錄乳鼠死亡時(shí)問(wèn)，結(jié)果顯示野生株的平均致夕匕時(shí)|日J(rèn)為65小時(shí)，而突變株的平均致死時(shí)I刈為9625小時(shí)，@apC突變株毒力明顯降低。