腺苷強化缺血預處理聯(lián)合冷晶體保護液對老年心肌保護的實驗研究.pdf

1、本文主要從以下幾部分展開論述：
　　第一部分
　　改良法建立離體心臟灌流及心肌缺血再灌注損傷模型
　　目的：改進傳統(tǒng)Langendorff離體心臟灌流模型建立方法，提高成功率。方法：游離新西蘭白兔上腔靜脈及升主動脈，套帶，剪開下腔、上腔靜脈，右心耳，剪斷升主動脈，插入灌注管，固定。灌注4℃ST. Thomas.Ⅱ心肌保護液，剪斷肺動脈干，心表降溫。停博后叢集樣結扎肺靜脈，剪斷，置入4℃ST.Thomas.Ⅱ液中。左房頂

2、插入左房灌注管和左室測壓管，結扎固定；主動脈灌注管接Langendorff灌注系統(tǒng)，充分排氣后灌注，再轉Neely左心做功模型。結果：正式試驗88例，成功率100％?？偸中g時間9-10 min，無熱缺血時間，冷缺血時間約4-5min。灌注后30 s內自動復跳率100%，心臟舒縮滿意，心功能保持良好。結論：改良法建立Langendorff離體心臟灌流模型穩(wěn)定可靠。
　　第二部分
　　缺血預處理聯(lián)合冷晶體保護液對老年心肌早期保護

3、的實驗研究
　　目的：研究缺血預處理結合冷晶體心肌保護液對老年新西蘭白兔心肌缺血再灌注損傷的早期保護作用及其可能機制。方法：采用離體工作心模型，離體心臟均經120分鐘15℃的全心冷缺血，而后37℃再灌注60分鐘。健康的老年新西蘭白兔32只（137±1周），隨機分成4組，每組8只：CON組：僅灌注4℃ST.Thomas.Ⅱ solution；IPC組：先全心缺血5min，恢復灌注5min，再予以4℃ST.Thomas.Ⅱ solut

4、ion；APC組:經主動脈根部側管注入1mmol/L腺苷/KH，之后即行缺血5min，恢復灌注5min，再予以4℃ST.Thomas.Ⅱ solution；ADO組：經主動脈根部側管注入1mmol/L腺苷/KH，10min后再予以4℃ST.Thomas.Ⅱ solution。觀察各組缺血前的基礎值及缺血后心功能恢復程度，測定心肌酶的漏出量、MDA及SOD，內皮功能，以及心肌組織中ATP含量,光鏡下觀察心肌形態(tài)學變化，電鏡下觀察心肌超微結

5、構變化，TUNEL法測定凋亡心肌細胞，并計算凋亡指數(shù)，RT-PCR測定Bcl-2和ICAM-l的mRNA表達量。結果：1.缺血前各組間SAP、LVSP、+dp/dt、-dp/dt、HR、CSF、CK、LDH、NO、ET、MDA和SOD值無差別(p>0.05)。2.再灌注期，APC組和ADO組CSF的恢復率在再灌注后15min、30min、60min時均高于CON組和IPC組（p<0.05）；其中APC組又高于ADO組（p<0.05）。A

6、PC組冠狀靜脈竇流出液中CK、LDH、MDA和ET均減少，而SOD及NO皆增加（p<0.05），其余3組間無差別(p>0.05)。3.APC組心肌組織ATP含量明顯高于CON組、IPC組和ADO組（p<0.05），其余3組間無差別(p>0.05)。4.APC組心肌細胞AI低于CON組、IPC組和ADO組（p<0.05），其余3組間無差別(p>0.05)。5.光鏡下形態(tài)學變化及電鏡下超微結構觀察，APC組明顯輕于CON組、IPC組和ADO

7、組，其余3組間無差別。6.Bcl-2mRNA的表達量APC組較其余各組皆高(p<0.05)，而其余3組間無差別(p>0.05)；ICAM-1mRNA的表達量APC組較其余各組皆低(p<0.05)，而其余3組間無差別(p>0.05)。結論：1.單純的IPC，未能進一步地增強ST.Thomas.Ⅱ solution處理的老年心肌的保護效果。2.單純的追加外源性ADO對心肌舒縮功能，能量代謝及抗凋亡等無明顯保護效果。3.APC是有效的，能增強

8、老年心肌的保護。4.APC聯(lián)合冷晶體保護液即聯(lián)用內源性和外源性的心肌保護方法在老年心肌保護中能起協(xié)同作用。
　　第三部分
　　缺血與藥物預處理聯(lián)合冷晶體保護液對老年心肌保護的實驗研究
　　目的：研究藥物預處理的延遲保護作用和缺血預處理的早期保護作用結合冷晶體心肌保護液對老年新西蘭白兔心肌缺血再灌注損傷的綜合保護作用及其可能機制。方法：健康的老年新西蘭白兔24只（137±1周），隨機分成3組，每組8只：于術前48h起予以

9、CCPA施行預處理，然后建立離體心臟灌流及心肌缺血再灌注損傷模型。離體心臟均經120分鐘15℃的全心冷缺血，而后37℃再灌注60分鐘。CCPA組（CCPA+ST.Thomas.Ⅱ solution，n=8）：術中僅灌注4℃ST.Thomas.Ⅱ solution；CCPA+ADO組（CCPA+ADO+ST.Thomas.Ⅱ solution，n=8）：經主動脈根部側管注入1mmol/L腺苷/KH，10min后再予以4℃ST.Thomas

10、.Ⅱ solution。CCPA+APC組（CCPA+APC+ST.Thomas.Ⅱ solution，n=8）：經主動脈根部側管注入1mmol/L腺苷/KH，之后即行缺血5min，恢復灌注5min，再予以4℃ST.Thomas.Ⅱ solution。觀察各組缺血前的基礎值及缺血后心功能恢復程度，測定心肌酶（CK、LDH）的漏出量、MDA及SOD，內皮功能（NO、ET），以及心肌組織中ATP含量,光鏡下觀察心肌形態(tài)學變化，電鏡下觀察心肌

11、超微結構變化，TUNEL法測定凋亡心肌細胞，并計算AI，RT-PCR測定Bcl-2和ICAM-l的mRNA表達量。結果：1.缺血前CCPA組、CCPA+ADO組及CCPA+APC組三組間SAP、LVSP、+dp/dt、-dp/dt、HR、CSF、CK、LDH、NO、ET、MDA和SOD值無差別(p>0.05)，但SAP、LVSP、+dp/dt、-dp/dt、CSF、NO和SOD值都較CON組和APC組高(p<0.05)，ET和MDA都較

12、CON組和APC組低(p<0.05)，而CK和LDH則與CON組和APC組無差別(p>0.05)。2.再灌注期，CCPA組、CCPA+ADO組及CCPA+APC組SAP、LVSP、+dp/dt、-dp/dt及CSF在再灌注后15分鐘、30分鐘、60分鐘時的恢復率皆高于CON組（p<0.05），三組間及同CON組和APC組間比較其變化幅度同上述的SAP的變化。3.CCPA組、CCPA+ADO組及CCPA+APC組心肌組織ATP含量明顯高于

13、CON組（p<0.05），三組間及同CON組和APC組間比較其變化幅度同上述的SAP的變化。4.CCPA組、CCPA+ADO組及CCPA+APC組心肌細胞AI低于CON組（p<0.05），三組間及同CON組和APC組間比較其變化幅度同上述的SAP的變化。5.光鏡下形態(tài)學變化及電鏡下超微結構觀察，CCPA+APC組損害最輕，CCPA+ADO組次之，CCPA組較差但也輕于CON組。6.Bcl-2mRNA的表達量 CCPA組、CCPA+ADO

14、組及 CCPA+APC組均較 CON組高(p<0.05)，ICAM-1mRNA的表達量均較CON組低(p<0.05)，兩者在各組間的變化幅度同上述的SAP的變化。結論：1.單純的CCPA進行藥物預處理是有效的，能為老年心肌提供多方面的保護，增加心肌對I/R損傷的耐受性，但效果弱于APC。2.使用ADO對CCPA進行強化后即CCPA+ADO，則效果與APC相近，能進一步的增強PPC的效果起到和強化的IPC相似的作用。3.CCPA+APC+

15、ST.Thomas.Ⅱ solution即內源性第二相和第一相的保護效果與外源性的保護效果在老年心肌保護中能起協(xié)同作用，三者的作用能相互疊加，在同一時間段內共同作用于老年心肌，起到顯著地增強老年心肌保護的效果。
　　第四部分
　　內源性腺苷（ADO）的產量和腺苷受體（ARs）mRNA表達的增齡性變化
　　目的：研究老年心肌與成年心肌的內源性ADO的產量和ARs(A1、A2A和A3AR)mRNA表達量的增齡性改變，及其與

16、老年心肌缺血預處理效果鈍化的關系。方法：健康的老年新西蘭白兔（137±1周）16只，隨機分成2組，每組8只；健康的成年新西蘭白兔（28±1周）16只，隨機分成2組，每組8只：分別檢測各組的內源性ADO的產量和A1、A2A和A3ARmRNA的表達量的基礎值和IPC后的變化值。結果：1.基礎的內源性ADO含量成年組高于老年組(p<0.05)。IPC后二組的內源性ADO含量皆較基礎值明顯上升(p<0.05)，成年組仍明顯地高于老年組(p<0.

17、05)。2.基礎A1ARmRNA的表達量老年組較成年組低(p<0.05)；老年組IPC后表達量高于成年組(p<0.05)。3.基礎A2AARmRNA的表達量老年組較成年組低(p<0.05)；老年組經過IPC后A2AARmRNA的表達量較基礎值下降明顯，幅度大于成年組，最終老年組IPC后表達量明顯低于成年組(p<0.05)。4.基礎A3ARmRNA的表達量老年組較成年組低(p<0.05)；經過IPC后表達量仍低于成年組(p<0.05)。結