缺血預(yù)處理對(duì)大鼠腎臟冷缺血再灌注損傷第二窗保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：觀察缺血預(yù)處理(ischemicpreconditioning，IPC)對(duì)大鼠腎臟冷缺血/再灌注(coldischemia/reperfusion，I/R)損傷第二窗保護(hù)(secondwindowofprotection，SWOP)的作用，探討白介素-1β(interlin-1β，IL-1β)在IPC的SWOP中的作用及機(jī)制。 方法：封閉群SD大鼠48只，隨機(jī)分為4組(n=12)：空白對(duì)照組(A組)，假手術(shù)組(B組)，對(duì)照

2、組(C組)，缺血預(yù)處理組D組)。動(dòng)物手術(shù)：應(yīng)用10％水合氯醛0.3ml/100g腹腔注射麻醉。B組，游離左腎蒂，45min后關(guān)閉腹腔切口，24h后，切除右腎；C組，游離左腎蒂，45min后關(guān)閉腹腔切口，24h后，切除右腎，通過(guò)右腎動(dòng)脈殘端插管對(duì)左腎原位灌注，通過(guò)右腎靜脈殘端直接將灌注液引流出體外，完成冷灌注后，無(wú)損傷血管夾阻斷左腎蒂，向左傾斜手術(shù)臺(tái)，將已充分游離的左腎牽至腹腔外，在裝有冰水混合物的保存袋中進(jìn)行冷保存，45min后，去除保

3、存袋，開(kāi)放血管夾，再灌注左腎，左腎復(fù)位，縫合切口；D組，游離左腎蒂，對(duì)大鼠左腎動(dòng)脈進(jìn)行四個(gè)循環(huán)的5min夾閉/5min放開(kāi)造成IPC，關(guān)閉腹腔切口，24h后，后重復(fù)C組操作。4組大鼠均在術(shù)后24h再次手術(shù)下腔靜脈采血、切除左腎用來(lái)檢測(cè)。檢測(cè)IPC后I/R的大鼠血清肌酐、尿素氮改變觀察腎功能變化情況，檢測(cè)腎組織勻漿中超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)含量；腎組織HE染色后，Paller法評(píng)分觀察腎組織損傷情況，免疫組化檢測(cè)IP

4、C后腎組織IL-1β活性的變化，TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞凋亡。 結(jié)果：1血漿BUN、Cr測(cè)定：A組與B組相比差異均無(wú)顯著性(P＞0.05)，C組、D組、均高于B組(P＜0.01)，而且C組高于D組，差異具有顯著性(P＜0.01)；2腎臟組織勻漿SOD活力、MDA測(cè)定：A組與B組相比差異均無(wú)顯著性(P＞0.05)，A組、B組腎組織勻漿SOD活力明顯高于C、D組(P＜0.01)，而且D組高于C組(P＜0.01)；A組、B組‘腎組織勻漿M

5、DA含量測(cè)定值低于C、D、組(P＜0.01)，而且D組低于C組(P＜0.01)；3形態(tài)學(xué)檢查(HE染色)：A組、B組腎臟組織形態(tài)結(jié)構(gòu)正常，C組腎小球內(nèi)紅細(xì)胞增多，腎小管腫脹，部分刷狀緣脫落，管腔內(nèi)可見(jiàn)脫落的細(xì)胞。D組較C組病變明顯減輕，僅見(jiàn)腎小球內(nèi)紅細(xì)胞增多。4免疫組化：A組、B組IL-1β微量表達(dá)，缺血再灌注后的C、D組表達(dá)均明顯增多(P＜0.01)，而且D組低于C組(P＜0.01)。5原位細(xì)胞凋亡：A、B組偶見(jiàn)腎小管上皮細(xì)胞凋亡，C

6、、D組明顯增多，凋亡細(xì)胞指數(shù)均明顯大于A、B組(P＜0.01)，同時(shí)，D組小于C組(P＜0.01) 結(jié)論：1本實(shí)驗(yàn)建立的模型要求條件簡(jiǎn)單、易行，便于用作研究腎移植冷缺血再灌注損傷相關(guān)的課題；2腎小管上皮細(xì)胞凋亡可能是冷缺血再灌注損傷的一個(gè)重要因素；3IPC引起腎組織白介素-1β表達(dá)明顯減低，而且減少大鼠腎臟冷缺血再灌注損傷后的腎小管細(xì)胞的凋亡，對(duì)大鼠腎臟冷缺血再灌注損傷有明顯的保護(hù)作用。推測(cè)IPC對(duì)IRI的保護(hù)可能與IL-1β表