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文檔簡(jiǎn)介
1、第一部分藥物后處理和或酸性緩沖液后處理對(duì)離體大鼠心肌保護(hù)作用研究
目的:
缺血后處理已經(jīng)證實(shí)具有心臟保護(hù)作用,并與線粒體膜通透性轉(zhuǎn)換孔狀態(tài)有關(guān)。同時(shí)還有研究發(fā)現(xiàn)在再灌注開(kāi)始短暫的酸性緩沖液灌注也具有心肌保護(hù)作用,其機(jī)制可能與線粒體膜通道轉(zhuǎn)換孔狀態(tài)有關(guān)。本研究通過(guò)心肌停搏液停搏的離體大鼠心臟模型,評(píng)價(jià)線粒體膜通透性轉(zhuǎn)換孔開(kāi)放阻斷劑環(huán)孢素A(cyclosporine A,CsA),酸性緩沖液或者含有環(huán)孢素的酸性緩
2、沖液是否具有與經(jīng)典缺血后處理相同的心肌保護(hù)作用。環(huán)孢素A后處理以及酸性緩沖液后處理心肌保護(hù)機(jī)制是否與抑制線粒體膜通透性轉(zhuǎn)換孔開(kāi)放有關(guān)。
方法:
取SD大鼠心臟,建立離體langendorff心肌缺血再灌注模型,隨機(jī)分五組(每組12只)。對(duì)照組(Con組):經(jīng)歷平衡期20分鐘,灌注停跳液后室溫模擬缺血30分鐘,再灌注60分鐘。缺血后處理組(Ipo組):再灌注開(kāi)始時(shí)給予10秒再灌注,10秒阻斷,共六個(gè)循環(huán)。環(huán)孢素
3、A后處理組(CsA組):再灌注開(kāi)始5分鐘給予含有環(huán)孢素A(0.8μ mol/L)Krebs—Henseleit緩沖液灌注。酸性緩沖液后處理組(Low pH組):再灌注開(kāi)始3分鐘給予酸性:Krebs-Henseleit緩沖液灌注(pH:6.8)。酸性緩沖液聯(lián)合環(huán)孢素A后處理(Low pH+CsA組):再灌注開(kāi)始3分鐘給予含有0.2μ mol/L環(huán)孢素A的酸性Krebs—Henseleit緩沖液灌注(pH:6.8)。檢測(cè)各組平衡期,再灌注5
4、、15、30、60分鐘血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo);Western blot法檢測(cè)胞漿細(xì)胞色素C含量;線粒體腫脹液檢測(cè)線粒體膜通透性轉(zhuǎn)換孔對(duì)Ca2+敏感度;TUNEL法檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡。
結(jié)果:
記錄平衡期,再灌注5,15,30和60分鐘,左室發(fā)展壓,±dp/dtmax,心率,冠狀動(dòng)脈流量。五組在平衡期無(wú)差異。左室發(fā)展壓:CsA組再灌注5,15,30分鐘時(shí),明顯優(yōu)于Con組;Low pH組再灌注15,30和60分鐘時(shí),明顯
5、優(yōu)于Con組;Low pH+CsA組再灌注5,15分鐘時(shí),明顯優(yōu)于Con組;Ipo組再灌注期的LVDP較Con組未見(jiàn)明顯差別。+dp/dtmax:CsA組再灌注5.15和30分鐘時(shí),明顯優(yōu)于Con組;Ipo組再灌注60分鐘時(shí),明顯優(yōu)于Con組;Low pH組再灌注30,60分鐘時(shí),明顯優(yōu)于Con組;Low pH+CsA組再灌注5,60分鐘時(shí),明顯優(yōu)于Con組。-dp/dtmax:CsA組再灌注5,15,30和60分鐘時(shí),明顯優(yōu)于Con組
6、;Ipo組再灌注60分鐘時(shí),明顯優(yōu)于Con組;Low pH組再灌注15和30分鐘時(shí),明顯優(yōu)于Con組;Low pH+CsA組再灌注5,15,30和60分鐘時(shí),明顯優(yōu)于Con組。心率:Low pH+CsA組再灌注5分鐘時(shí),明顯優(yōu)于Con組,其余各組心率與Con無(wú)明顯差別。再灌注期間各組冠脈流量較平衡期明顯減少,各時(shí)間點(diǎn)組間比較,均無(wú)顯著差異。Ipo組,CsA組,Low pH組和Low pH+CsA組的胞漿細(xì)胞色素C釋放,較Con組明顯減少
7、。平衡期各組線粒體對(duì)Ca2+誘導(dǎo)的通透性轉(zhuǎn)換孔開(kāi)放敏感度無(wú)明顯差別;再灌注5分鐘線,Ipo組,CsA組,Low pH組和:LowpH+CsA組線粒體對(duì)Ca2+誘導(dǎo)的通透性轉(zhuǎn)換孔開(kāi)放敏感度較Con明顯降低。Ipo組,CsA組,Low pH組和Low pH+CsA組的心肌細(xì)胞凋亡率(1.38±0.41,1.10±0.22,1.50±0.50,1.60±0.89,每1000個(gè)細(xì)胞)明顯低于Con組(3.60±0.89,每1000個(gè)細(xì)胞),(p
8、<0.05)。
結(jié)論:
本研究顯示經(jīng)典缺血后處理,環(huán)孢素A后處理,酸性緩沖液后處理或聯(lián)合環(huán)孢素A后處理能夠減輕再灌注損傷引起的線粒體膜通透性轉(zhuǎn)換孔開(kāi)放增加所導(dǎo)致的細(xì)胞色素C釋放,降低線粒體膜通透性轉(zhuǎn)換孔對(duì)Ca2+敏感性,進(jìn)而減少心肌細(xì)胞凋亡,環(huán)孢素A后處理,酸性緩沖液后處理或聯(lián)合環(huán)孢素A后處理同時(shí)可以改善心臟血流動(dòng)力學(xué)狀況,可以達(dá)到與經(jīng)典后處理相同的心肌保護(hù)作用,此外酸性緩沖液后處理與環(huán)孢素A后處理聯(lián)合應(yīng)用并
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