供肝缺血預(yù)處理保護(hù)作用的實驗研究.pdf

1、研究背景： 組織、器官經(jīng)受一次或數(shù)次短暫的缺血再灌注后，能提高對隨后較長時間缺血再灌注損傷的耐受能力，這種現(xiàn)象稱為缺血預(yù)處理(IschemiaPreconditioning,IP)。自1908年P(guān)ringle在肝臟手術(shù)中采取手法肝蒂阻斷以明顯減少手術(shù)失血以來，肝門阻斷、選擇性半肝血流阻斷、全肝血流阻斷等一系列外科技術(shù)的應(yīng)用，以及肝移植、休克等過程中，均遇到缺血再灌注(Ischemia/reperfusion，I/R)損傷問題。I

2、/R損傷已成為現(xiàn)階段臨床工作研究熱點之一。針對I/R損傷的普遍性和可能機(jī)制，Marry等首先在1986年研究心肌IR損傷時，首次提出缺血預(yù)處理的概念。之后大量實驗研究亦證明了IP的心肌保護(hù)作用且缺血預(yù)處理保護(hù)效應(yīng)現(xiàn)象存在于不同種屬(大鼠、豬、犬、人)的不同組織和器官(心、肺、腦、骨骼肌、腸)，但在肝臟方面的研究很少，尤其是肝移植方面罕見報道。 目的： 通過對小型版納豬用非轉(zhuǎn)流的方法施行豬原位肝移植手術(shù)，建立穩(wěn)定移植模型。

3、研究分析小型版納豬供肝經(jīng)過缺血預(yù)處理后產(chǎn)生的保護(hù)效應(yīng)，從而獲得缺血預(yù)處理臨床應(yīng)用的理論依據(jù)，并且為活體肝移植提供可借鑒的資料。 方法： 將實驗用小型版納豬(5-6月齡，體重13-18公斤，雌雄不限，來自同一母系)25只隨機(jī)分成正常對照組、缺血再灌注組、缺血預(yù)處理組三組。其中正常組5只，其余2組每組各10只，其中5只為受體、5只為供體。受體供體術(shù)前24小時禁食，12小時禁水。在建立頸內(nèi)動脈測壓及頸內(nèi)靜脈輸液通道后行原位肝移

4、植手術(shù)。術(shù)后給予輸血、補(bǔ)液、抗炎等支持治療。然后分別于麻醉后、術(shù)后1天、術(shù)后2天、術(shù)后3天、術(shù)后7天于手術(shù)中建立的左頸內(nèi)靜脈留置管采血，通過速率法檢測血清AST、ALT的活性變化，于各受體術(shù)后3天后通過基礎(chǔ)麻醉取肝組織，采用HSP70免疫印跡法檢測HSP70的表達(dá)量，同時按光鏡和透射電鏡要求取材、制片觀察光鏡和電鏡下細(xì)胞形態(tài)學(xué)損害。對相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理。 結(jié)果： 本實驗共進(jìn)行小型版納豬原位肝移植手術(shù)10次，手術(shù)順利，

5、無術(shù)中死亡，各組的實驗動物手術(shù)后7天存活率均為100％；10天存活率缺血再灌注組為40％，缺血預(yù)處理組為80％，死亡后進(jìn)行尸體解剖，再灌注組3例均死于重度排斥，缺血預(yù)處理組1例死于腹腔內(nèi)多發(fā)性膿腫。缺血再灌注組術(shù)后血清轉(zhuǎn)氨酶水平較缺血預(yù)處理組明顯升高(P＜001)；預(yù)處理組HSP70表達(dá)量明顯增加，缺血再灌注組HSP70表達(dá)量僅輕度增加，正常對照組HSP70表達(dá)不明顯。缺血再灌注組的肝小葉細(xì)胞明顯濁腫，呈氣球樣改變，易見點狀、灶狀壞死區(qū)

6、，匯管區(qū)明顯擴(kuò)大、水腫。而缺血預(yù)處理組的細(xì)胞輕度濁腫，無壞死，匯管區(qū)基本正常。與缺血再灌注組比較，缺血預(yù)處理組病理改變中急性排斥反應(yīng)和缺血再灌注損傷明顯較輕；另外通過透射電鏡觀察到缺血再灌注組的肝細(xì)胞腫脹，內(nèi)皮細(xì)胞變形，線粒體腫脹，呈氣球樣改變，基質(zhì)加深、減少，呈絮狀改變，嵴減少，排列紊亂，細(xì)胞核內(nèi)染色體核邊聚。缺血預(yù)處理組細(xì)胞僅有少量中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞浸潤，形態(tài)基本接近正常對照組。 結(jié)論： 在非轉(zhuǎn)流條件下小型版納豬原