缺血預處理及UW液聯(lián)合丹參酮ⅡA灌洗對缺血組織保護性研究.pdf

1、第一部分缺血預處理對大鼠橫行腹直肌皮瓣的保護及其影響因素的研究。 1.1目的： 應用大鼠TRAM皮瓣模型，探討缺血時間、間隔再灌注時間及預處理次數(shù)對IPC的效應的影響，為尋找合理而有效的IPC方案提供依據(jù)，從而使缺血預處理對皮瓣組織的保護更為有效。 1.2材料與方法： 選用wistar大鼠62只，建立TRAM皮瓣模型。 本研究分為兩個階段：第一階段：建模后隨機分為對照組和4個預處理組(IPC)，每

2、組10只，探討缺血時間、間斷再灌注時間對IPC的保護效應的影響。對照組皮瓣單純放置30 min后，應用微血管夾阻斷腹壁下血管誘導皮瓣缺血4 h，然后恢復皮瓣正常血供；IPC組皮瓣在誘導缺血前均經(jīng)過IPC處理，根據(jù)IPC方案的不同分為4組：即以微血管夾阻斷腹壁下血管5 min，再恢復血供5 min，處理2次，稱為IPC<,5/5>組，依此類推得到IPC<,5/10>組(缺血5 min/再灌注10 min，處理2次)、IPC<,10/10>

3、組(缺血10 min/再灌注10 min，處理2次)、IPC <,10/5>組(缺血10 min/再灌注5 min，處理2次)，其他處理與對照組相同。皮瓣恢復血供4 h后采集標本(每組取4只)，通過測定血清中CPK、骨骼肌組織含水量和MDA含量，以及HE染色觀察骨骼肌組織結構；術后第7 d，計算皮瓣存活面積百分比(每組剩余6只)，評估皮瓣組織的I/R損傷程度及其存活情況。第二階段：在第一階段結果基礎上，選擇第一階段中IPC保護效果最佳的

4、IPC方案，再附加兩個預處理組：即預處理1次組、預處理3次組，每組6只，進一步觀察預處理次數(shù)(1～3次)對IPC的保護效應的影響。術后第7 d，計算皮瓣存活面積百分比，評估皮瓣存活情況。 1.3結果： 第一階段研究中，所有預處理組中血清CPK含量及腹直肌含水量、MDA的含量較對照組均有顯著下降(P<0.01)，并有效抑制腹直肌纖維的水腫程度及白細胞的浸潤，特別是IPC<,10/5>組中各項指標降低幅度更為顯著，并與其他預

5、處理組比較存在顯著性差異(P<0.05)。對照組皮瓣平均存活面積為23.6±3.1﹪；各預處理組皮瓣平均存活面積與對照組比較提高2.5～3倍(P<0.01)，尤其是在IPC<,10，5>組中皮瓣平均存活面積提高的更為顯著，并與其他預處理組比較也存在顯著性差異(P<0.05)。 第二階段研究選擇IPC<,10/5>方案作為研究對象，結果表明2次IPC<,10/5>和3次IPC<,10/5>改善皮瓣存活的效果較1次IPC<,10/5

6、>更為顯著(P<0.05)，而2次IPC<,10/5>與3次IPC <,10/5>間比較無顯著性差異(P>0.05)。 1.4結論： 1、IPC可提高大鼠TRAM皮瓣對缺血的耐受，并減輕TRAM皮瓣組織的I/R損傷。 2、與其他預處理組比較，IPC<,10/5>(缺血10 min，再灌注5 min)組中各項檢測指標的改善最為明顯，表明缺血10 min、間斷再灌注5 min方案對誘導大鼠TRAM皮瓣的IPC保護效應

7、更為有效，這些結果顯示缺血時間/間斷再灌注時間可能是影響IPC保護效應的關鍵性因素；預處理次數(shù)不同組間比較，發(fā)現(xiàn)2次IPC<,10/5>組及3次。IPC<,10/5>組中TRAM皮瓣的平均存活面積明顯高于1次IPC<,10/5>組，這提示在一定程度上，IPC的保護效應可能產(chǎn)生部分疊加，提示預處理次數(shù)也是影響1PC的保護效應的重要因素?？傊琁PC可減輕TRAM皮瓣組織的I/R損傷，其保護效應受缺血時間/間斷再灌注時間及預處理次數(shù)的影響，

8、本研究結果顯示IPC<,10/5>方案(缺血10 min，間斷再灌注5 min)對皮瓣保護更為有效，并以預處理2～3次為宜。 第二部分 UW液聯(lián)合丹參酮ⅡA灌洗對缺血肢體的保護。 2.1目的： 應用大鼠缺血肢體模型，觀察UW液及UW液+丹參酮Ⅱ A灌洗對缺血肢體I/R損傷的影響，并探討所添加丹參酮ⅡA的劑量與其保護效應的關系，從而評估UW液聯(lián)合丹參酮Ⅱ A灌洗在減輕缺血肢體I/R損傷中的應用價值。 2.2

9、材料與方法： 選用SD大鼠40只，隨機分為5組，每組8只。缺血再灌注(I/R)組中動物通過阻斷股動脈造成肢體缺血4h，然后恢復其血供；4個灌洗組于肢體缺血3.5h后，應用不同灌洗液經(jīng)腹壁淺動脈進行灌洗30min，根據(jù)灌洗液分為UW組、UW+T<,0.05>組(0.05mg/mL)、UW+T<,0.1>組(0.1mg/mL)和Uw+TM<,0.2>組(0.2mg/mL)，肢體內(nèi)殘存血液及灌洗液自腹壁淺靜脈流出；所有實驗動物恢復血供

10、后均持續(xù)灌注6h；于不同時間點，采集血清及骨骼肌標本進行各項相關檢測。通過監(jiān)測骨骼肌再灌注血流量的變化，測定血清中CPK、 AST、LDH的含量及骨骼肌中MDA、SOD、ATP酶活性以及含水量，并檢測骨骼肌血管內(nèi)皮ICAM-1的表達、骨骼肌細胞的凋亡及骨骼肌超微結構的變化，來綜合評估缺血肢體的I/R損傷程度。 2.3結果： 缺血肢體應用UW液及UW液+丹參酮ⅡA液灌洗后，均可有效的抑制再灌注時骨骼肌過度灌注現(xiàn)象，并較好地

11、維持了骨骼肌的血流灌注量?；謴凸嘧?h時，UW組中血清中CPK、AST和LDH含量較I/R組降低20～30﹪(P<0.01)，而恢復灌注4 h和6 h時，與I/R組比較則無明顯差異(P>0.05)；恢復灌注2h、4h、6h時，UW液+丹參酮ⅡA灌洗組的血清中各細胞內(nèi)酶含量與I/R組比較均有顯著性差異(P<0.05～P<0.01)，特別是UW+T<,0.1>組及UW+T<,0.2>組細胞內(nèi)酶含量降低更為顯著(P<0.01，vs UW)。缺

12、血4h時，UW組中骨骼肌含水量及MDA含量較I/R組明顯降低，而SOD及ATP酶活性卻較FR組明顯升高(P<0.05～P<0.01)；恢復灌注6h時，UW組中各項檢測指標與I/R組比較無顯著性差異(P>0.05)。缺血及再灌注期，UW液+丹參酮ⅡA組中各項指標均明顯優(yōu)于與I/R組(P<0.01)。 UW液和UW液+丹參酮Ⅱ A灌洗，均不同程度地抑制了骨骼肌血管內(nèi)皮ICAM-1的表達和細胞的凋亡(P<0.05～P<0.01)，較好

13、的維持了骨骼肌纖維的超微結構；并以UW液聯(lián)合丹參酮ⅡA應用更為有效，特別是UW+T<,0.1>組、UW+T<,0.2>組中保護效果最為顯著(P<0.01，vs UW)。 2.4結論： 1、應用UW液及UW液+丹參酮ⅡA灌洗，均在不同程度上減輕缺血肢體I/R損傷，提示適當?shù)膭用}灌洗對缺血肢體組織具有保護作用。 2、UW液+丹參酮ⅡA灌洗較單獨UW液灌洗對缺血肢體的保護作用更為有效，表明UW液與丹參酮ⅡA聯(lián)合應用可能