酒石酸銻鉀對L-02肝細(xì)胞的損傷作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的： 在體外試驗系統(tǒng)，探討三價銻化合物～酒石酸銻鉀(potassiumantimonyl tartrate，PAT)對L-02肝細(xì)胞的毒性影響及其作用機(jī)制。 方法：以L-02肝細(xì)胞為受試細(xì)胞，通過MTT試驗檢測不同濃度的酒石酸銻鉀對L-02肝細(xì)胞存活率的影響，選擇細(xì)胞存活率為40％-90％的濃度進(jìn)行后續(xù)實驗。設(shè)置5個PAT處理組即100gmol／L、200umol／L、400umol／L、800umol／L、1600

2、umol／L和1個對照組，PAT處理細(xì)胞時間為24h。L-02肝細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變和細(xì)胞周期的變化分別用HE染色法和流式細(xì)胞儀檢測分析；PAT對L-02肝細(xì)胞膜通透性影響和細(xì)胞毒性作用采用乳酸脫氫酶(LDH)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)活性水平來評價；PAT誘導(dǎo)L-02肝細(xì)胞氧化損傷程度選用超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮合成酶(NOS)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)和一氧化氮(NO)含量等指標(biāo)評價；用線粒體跨膜

3、電位(△ψm)檢測細(xì)胞線粒體損傷；用熒光比色法測定細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度；用單細(xì)胞凝膠電泳(SCGE)檢測肝細(xì)胞DNA損傷。 結(jié)果： 1．PAT引起L-02肝細(xì)胞存活率降低：在100-1600umol／LPAT處理濃度，能明顯引起L-02肝細(xì)胞存活率的降低，且存在著濃度．反應(yīng)關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r=-0.950。 2．PAT引起L-02肝細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變：PAT處理24h，引起L-02肝細(xì)胞皺縮或腫大，染色質(zhì)濃染，細(xì)胞間

4、隙擴(kuò)大，隨著PAT濃度的增加變化明顯，細(xì)胞密度也明顯減少，細(xì)胞膜和核膜不完整或消失，染色質(zhì)嗜堿性降低。 3．PAT對L-02細(xì)胞周期的影響：PAT引起L-02細(xì)胞周期發(fā)生變化：在100umol／L、200umol／LPAI組，引起S期細(xì)胞增加，其中以200umol／LPAT明顯高于對照組(P<0.05)；但各PAT處理組，均引起G<,2>期細(xì)胞減少，與對照組比較差異有顯著性(P<0.05)。 4．PAT引起細(xì)胞膜通透性增

5、加且有細(xì)胞毒性作用：PAT引起細(xì)胞培養(yǎng)上清液中LDH、AST、ALT活性增加(p<0.05)。 5.PAT所致DNA損傷:PNT能明顯誘導(dǎo)細(xì)胞DNA的鏈斷裂,劑量越高,DNA斷裂程度越嚴(yán)重(p<0.05)。 6.PAT導(dǎo)致L-02細(xì)胞氧化損傷:PAT導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)的MDA和NO的含量增加,NOS、SOD活性增強(qiáng),GSH含量減少(p<0.05)。 7.PAT對線粒體膜電位的影響:用PAT處理的L-02細(xì)胞,熒光吸光光度

6、值升高,線粒體膜電位明顯降低(p<0.05),且有劑量一反應(yīng)關(guān)系(r=0.962)。 8.PAT對鈣穩(wěn)態(tài)的影響:在低劑量處理組,細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度降低,400μmol/L及以上劑量,導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度顯著增加(p<0.05)。 結(jié)論: PAT在一定濃度下,能引起L-02肝細(xì)胞存活率下降,細(xì)胞膜通透性增加和細(xì)胞周期改變,并誘發(fā)DNA損傷,對肝細(xì)胞具有明顯的損傷作用;其損傷的作用機(jī)制可能與PAT導(dǎo)致肝細(xì)胞氧化損傷