Cr(Ⅵ)對L-02肝細(xì)胞線粒體呼吸鏈復(fù)合體的影響.pdf

1、目的:
　　 探討Cr(Ⅵ)對L-02肝細(xì)胞線粒體DNA編碼呼吸鏈復(fù)合體亞基基因的表達(dá)水平、呼吸鏈復(fù)合體活性與能量代謝的影響以及它們的相互聯(lián)系，為進(jìn)一步探索Cr(Ⅵ)所致線粒體能量代謝障礙的分子機(jī)制提供實驗依據(jù)。
　　 方法:
　　 用不同濃度Cr(Ⅵ)(0、2、4、8、16、32、64、128μmol/L)分別處理體外培養(yǎng)的人胚L-02肝細(xì)胞24h后，通過MTT試驗檢測不同濃度Cr(Ⅵ)對L-02肝細(xì)胞存活率的

2、影響，選擇低、中、高3個Cr(Ⅵ)處理濃度，即2、8、32μmol/L進(jìn)行后續(xù)實驗，處理時間為24h。用細(xì)胞總RNA提取試劑盒分離肝細(xì)胞總RNA，線粒體ND1、ND2、Cytb、COXⅠ-Ⅲ、ATPase6和ATPase8基因表達(dá)水平用逆轉(zhuǎn)錄-熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(qRT-PCR)測定;細(xì)胞ATP含量、線粒體呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ-Ⅴ活性與細(xì)胞ROS含量分別用化學(xué)發(fā)光法、紫外分光光度法和熒光分光光度法檢測。
　　 結(jié)果:
　　

3、 1.Cr(Ⅵ)引起L-02肝細(xì)胞生存率降低:Cr(Ⅵ)在2～128μmol/L濃度范圍內(nèi)，可引起肝細(xì)胞存活率顯著降低(P＜0.05）。Cr(Ⅵ)對細(xì)胞生存率的影響表現(xiàn)出明顯的劑量-效應(yīng)關(guān)系，肝細(xì)胞生存率與Cr(Ⅵ)處理濃度呈顯著負(fù)相關(guān)關(guān)系(r=-0.888，P＜0.05)。
　　 2.Cr(Ⅵ)誘導(dǎo)肝細(xì)胞ROS生成增多:各Cr(Ⅵ)處理組肝細(xì)胞內(nèi)ROS含量增高，其中8、32μmol/L Cr(Ⅵ)處理組與對照組相比差異有統(tǒng)計學(xué)

4、意義（P＜0.05）。Cr(Ⅵ)處理濃度與肝細(xì)胞內(nèi)ROS水平之間存在明顯正相關(guān)關(guān)系(r=0.993，P＜0.05)。
　　 3.Cr(Ⅵ)對線粒體DNA基因表達(dá)的影響2μmol/L Cr(Ⅵ)可增強(qiáng)Ctyb、ATPase6和ATPase8基因的表達(dá)，下調(diào)ND2基因表達(dá)(P＜0.05）;8μmol/L Cr(Ⅵ)上調(diào)ND1、ND2、Cytb、COXⅠ和COXⅢ基因的表達(dá)，而引起ATPase6和ATPase8基因表達(dá)減弱(P＜0.0

5、5);32μmol/L Cr(Ⅵ)可引起ND1、ND2、COXⅠ-Ⅲ基因表達(dá)增強(qiáng)，而使ATPase6和ATPase8基因表達(dá)下降（P＜0.05）。
　　 ＜4.Cr(Ⅵ)對呼吸鏈復(fù)合體活性的影響:2、8、32μmol/L Cr(Ⅵ)染毒處理，均可使呼吸鏈復(fù)合體Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ活性顯著下降(P＜0.05）;各Cr(Ⅵ)處理組復(fù)合體Ⅱ活性的降低與對照組相比沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 5.Cr(Ⅵ)對肝細(xì)胞內(nèi)ATP含