JNK信號通路在NaAsO2誘導L-02肝細胞凋亡過程中的作用.pdf

1、目的：探討不同濃度NaAsO2對L-02肝細胞凋亡的影響，研究JNK信號通路在NaAsO2誘導L-02肝細胞凋亡中的作用，為探索JNK信號通路在砷致肝損傷的機制研究中的作用提供一定實驗依據(jù)。
　　方法：實驗分為空白對照組、SP600125對照組、染毒組和抑制劑組。SP600125對照組和抑制劑組實驗前用 JNK特異性抑制劑（SP600125）處理 L-02肝細胞30min，再同正常對照組和染毒組一起用不同濃度NaAsO2處理L-0

2、2肝細胞24h，采用MTT法檢測L-02肝細胞存活率；流式細胞術(shù)檢測L-02肝細胞細胞凋亡率；RT-PCR技術(shù)檢測 L-02肝細胞中 Jnk、Bcl-2、Bax、Caspase-9、Caspase-3基因mRNA相對表達；Western-blot技術(shù)檢測L-02肝細胞中Jnk、p-Jnk、Bcl-2、Bax、Caspase-9、Caspase-3蛋白的相對表達。
　　結(jié)果：1.NaAsO2對L-02肝細胞生長和凋亡的影響：與正常對

3、照組相比，各染毒組的細胞存活率隨 NaAsO2濃度的增加而降低，差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)；各染毒組的細胞凋亡率隨NaAsO2濃度的增加而升高，差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。
　　2.NaAsO2對L-02肝細胞內(nèi)Jnk表達水平的影響：RT-PCR顯示：與正常對照組相比，各染毒組的細胞內(nèi) Jnk mRNA相對表達量 NaAsO2濃度的增加而增高，100μmol/L、150μmol/L增高明顯，差異有統(tǒng)計學意義(p<0.0

4、5)；Western-blot顯示：與正常對照組相比，各染毒組的細胞內(nèi) Jnk、p-Jnk蛋白表達量均高于正常對照組，差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。
　　3.NaAsO2對L-02肝細胞內(nèi)Bax、Bcl-2表達水平的影響：RT-PCR和Western-blot均顯示：與空白對照組相比，各染毒組的細胞內(nèi) Bax、Bcl-2表達量均增高，差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)；各染毒組的Bax/Bcl-2 mRNA相對表達量的比值有隨劑

5、量的增加而升高的趨勢，100μmol/L組低于正常對照組，差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)；各NaAsO2組的Bax/Bcl-2蛋白表達量的比值均高于正常對照組，差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。
　　4.NaAsO2對 L-02肝細胞內(nèi) Caspase-9、Caspase-3表達水平的影響：RT-PCR和Western-blot均顯示：與空白對照組相比，各染毒組的細胞內(nèi) Caspase-9和Caspase-3表達量均增高，100

6、μmol/L、150μmol/L組差異均有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。
　　5.SP600125對NaAsO2作用L-02肝細胞的影響：SP600125可降低NaAsO2對L-02肝細胞的生長抑制作用，150μmol/L抑制劑組細胞存活率較染毒組增高，差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)；50μmol/L、150μmol/L抑制劑組細胞凋亡率較染毒組降低，差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。RT-PCR顯示：各抑制劑組細胞內(nèi)Jnk、Ba

7、x、Caspase-9 mRNA相對表達量較染毒組表達降低，差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)；各抑制劑組細胞內(nèi) Bcl-2 mRNA相對表達量增高，差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)；各 NaAsO2組的Bax/Bcl-2 mRNA相對表達量的比值較染毒組降低，差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)；各抑制劑組細胞內(nèi)Caspase-3 mRNA相對表達量較染毒組表達降低，100μmol/L、150μmol/L降低明顯,差異有統(tǒng)計學意(p<0.0

8、5)；Western-blot顯示：50μmol/L、100μmol/L抑制劑組細胞內(nèi)Jnk較染毒組表達降低，差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。各抑制劑組細胞內(nèi)p-Jnk蛋白表達量較染毒組表達降低，除150μmol/L組外差異均有統(tǒng)計學意義(p<0.05)；各抑制劑組細胞內(nèi)Bax、Caspase-9蛋白表達量較染毒組差異明顯，差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)；50μmol/L抑制劑組細胞內(nèi)Bcl-2蛋白表達量較染毒組降低，差異有統(tǒng)計學意

9、義(p<0.05)。100μmol/L抑制劑組細胞內(nèi)Bax/Bcl-2蛋白表達量的比值高于染毒組，其余各組均低于染毒組，差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)；150μmol/L抑制劑組細胞內(nèi)Caspase-3蛋白表達量高于染毒組，其余各組均低于染毒組，差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。
　　結(jié)論：1. NaAsO2能抑制L-02肝細胞的生長、誘導細胞凋亡的發(fā)生；NaAsO2誘導L-02肝細胞凋亡的機制可能與激活JNK，增加p-JNK蛋