抑制JNK信號通路的激活對腎缺血-再灌注誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的:觀察JNK(c-Jun N-terminal kinase，c-Jun N端蛋白激酶)及底物c-Jun在腎臟缺血再灌注時的活性變化情況，探討JNK通路的激活對腎缺血再灌注誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞凋亡的影響；應(yīng)用JNK特異性抑制劑SP600125進(jìn)一步明確JNK通路在腎小管上皮細(xì)胞凋亡的作用，尋找抑制腎小管上皮細(xì)胞凋亡的靶標(biāo)；探討金納多(Ginaton)對腎小管上皮細(xì)胞凋亡的影響及分子機(jī)制。 方法:采用雙側(cè)夾閉大鼠腎蒂，缺血45

2、min后再灌注不同時間的方法，制備動物模型。雄性SD大鼠隨機(jī)分為：假手術(shù)(Sham)組、再灌注不同時間(I/R)組、溶媒(vehicle)組、藥物(SP、Ginaton)組，每組6只大鼠。再灌注不同時間組又分為：R 0 min、R 5 min、R 20 min、R 90 min、R 3 h、R 6 h、R 24 h組。首先觀察JNK，c-Jun激活變化及細(xì)胞凋亡情況。根據(jù)上述JNK，c-Jun的激活高峰，細(xì)胞凋亡的高峰時間點，術(shù)前腹腔注

3、射SP600125(15mg．kg<'-1>)、Ginaton(12.5mg．kg<'-1> 25mg．kg<'-1>，50 mg．kg<'-1>)，等體積的溶媒(i．p)，缺血45min，分別再灌注：20 min，3 h，24 h。在預(yù)定時間點采用Westem blotting(免疫印跡)分析JNK及底物c-Jun在上述再灌注不同時間點的激活和表達(dá)的變化情況。TUNEL(原位末端標(biāo)記法)、流式細(xì)胞術(shù)檢測腎小管上皮細(xì)胞凋亡。熒光顯微鏡觀

4、察形態(tài)學(xué)變化。 結(jié)果: 1．JNK信號通路的激活對腎臟I/R誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞凋亡的影響 JNK激酶的磷酸化水平在再灌注5min時迅速增高，再灌注20min達(dá)到最高峰，再灌注6h明顯下降，再灌注24h基本恢復(fù)基礎(chǔ)水平。再灌注后c-Jun的磷酸化水平也增高，再灌注3 h達(dá)到最高峰，再灌注24h基本恢復(fù)基礎(chǔ)水平。提示，可能是腎臟I/R誘導(dǎo)了JNK通路的激活。TUNEL檢測結(jié)果顯示，隨著腎臟缺血再灌注時間的延長，腎小

5、管上皮細(xì)胞凋亡明顯增多。提示，JNK通路的激活可能促進(jìn)腎臟I/R誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞凋亡。 2．抑制JNK信號通路的激活能拮抗腎臟I/R誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞凋亡 SP600125顯著抑制JNK(vs．I/R 20 min，p<0.01)和c-Jun(vs．I/R．3 h，p<0.01)的磷酸化。并且，SP600125能明顯減少腎小管上皮細(xì)胞凋亡的數(shù)量(vs．I/R 24 h，P<0.05)，改善腎組織病理損傷。上述結(jié)果進(jìn)

6、一步證明腎臟I/R誘導(dǎo)了JNK通路的激活，且抑制JNK信號通路的激活可以拮抗腎小管上皮細(xì)胞的凋亡，減輕缺血再灌注損傷。 3．金納多(Ginaton)對腎小管上皮細(xì)胞凋亡的影響 金納多明顯抑制腎I/R誘導(dǎo)的JNK(vs．I/R 20 min，p<0.05)和c-Jun(vs．I/R 3 h，p<0.05)的磷酸化。同時，金納多減少腎I/R誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞凋亡的數(shù)量(vs．I/R 24 h，p<0.05)，改善腎臟組織病