阻斷MyD88探索TLR信號通路對小鼠腎缺血再灌注損傷的長期影響及其機(jī)理.pdf

1、目的：應(yīng)用創(chuàng)新性的MyD88抑制劑TJ-M2010-2以及 MyD88KO小鼠來研究 TLR/MyD88信號通路對于小鼠腎缺血再灌注損傷后的長期影響。
　　方法：體內(nèi)實驗主要以雄性 BALB/C小鼠為實驗對象,分為4組:SHAM組、缺血再灌損傷IRI組、TJ-M2010-2組和MyD88KO組，每組于再灌注24h,3d,7d,14d,28d各6只分別取外周血及左腎。TJ-M2010-2組于腎臟缺血-3,-2,-1,0,1,3,5,

2、7,14天用0.5％羧甲基纖維素(CMC)溶解TJ-M2010-2，以100mg/kg腹腔注射并行IR，中線開腹，在32℃溫箱內(nèi)行左側(cè)腎締游離，無損血管夾阻斷60min后開放，保留右腎，關(guān)腹。其余組予以等量的CMC行相同操作。 ELISA檢測各組24h炎性因子IL-1β, IL-6, TNF-α及MCP-1水平。HE染色檢測組織病理損傷， MPO免疫熒光反應(yīng)中性粒細(xì)胞浸潤。ELISA和Fibronectin、Collagen IV及α-

3、SMA免疫組化，分別檢測各組28d血清TGF-β1水平和纖維化程度。另取各組28d中6只小鼠行右腎摘除后24h，即29d組，檢測血清中肌酐和尿素氮水平。在體外試驗中，以HK-2細(xì)胞為實驗對象，用TGF-β1誘導(dǎo)上皮間質(zhì)化（EMT），分對照組、TGF-β1組和TJ-M2010-2+TGF-β1組，光鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)， Western blot檢測E-cadherin、Vimentin和α-SMA蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：TJ-M2010

4、-2組與MyD88KO組較IRI組，在IRI24h中的IL-1β, IL-6, TNF-α, MCP-1顯著降低；組織損傷以及炎性細(xì)胞浸潤程度明顯減輕。在IRI28d中的血清TGF-β1水平和纖維化程度明顯降低。血肌酐和尿素氮在IRI術(shù)后24h中無差異，而在IRI29d中TJ-M2010-2組與 MyD88KO組較 IRI組水平降低。體外實驗中， TJ-M2010-2+TGF-β1組相對于TGF-β1組細(xì)胞形態(tài)上間質(zhì)化程度少，表現(xiàn)為E-