Notch信號通路分子在hUMSCs向胰島前體細胞誘導過程中的表達.pdf

1、目的：探討Notch信號節(jié)點分子Notch1、Hes1在人臍帶間充質(zhì)干細胞（hUMSCs）向胰島前體細胞分化過程中的表達及其與Ngn3的關(guān)系。
　　方法:
　　1.分離培養(yǎng)并鑒定hUMSCs；
　　2.采用聯(lián)合分階段誘導法，取P5代hUMSCs向胰島前體細胞分化，倒置相差顯微鏡觀察誘導前后（第7天、14天、21天）細胞形態(tài)變化，免疫細胞化學技術(shù)檢測誘導后Ngn3、Pdx-1、胰高血糖素的表達；
　　3.電鏡觀察誘

2、導前后的胰島前體細胞與對照組hUMSCs的結(jié)構(gòu)差異；
　　4.誘導后（第7天、14天、21天）分別取細胞進行免疫細胞化學法、real-time PCR、Western-blot檢測Notch信號通路相關(guān)分子以及Ngn3的表達變化；
　　5.加入γ分泌酶抑制劑（γ-secretase inhibitor）DAPT后，Western-blot檢測Notch信號通路相關(guān)分子以及Ngn3的表達變化。
　　結(jié)果：成功分離培養(yǎng)hU

3、MSCs，經(jīng)誘導后細胞胞體呈現(xiàn)寬大形態(tài)，并出現(xiàn)胰島前體細胞的集落，免疫細胞化學技術(shù)檢測誘導21天后細胞Ngn3、Pdx-1、胰高血糖素均呈陽性表達，電鏡結(jié)果顯示胞體內(nèi)有分泌顆粒；Western-blot檢測Ngn3在誘導過程中逐漸升高，至誘導14d達到峰值，21d下降；Notch1在誘導后7d時最高，對照組最低；Hes1的表達7d、14d與對照組無明顯差異，于21d下降；添加DAPT后，Notch信號通路節(jié)點分子Hes1表達量下降，同時