胚胎干細胞分化過程中Notch-bHLH信號轉(zhuǎn)導系統(tǒng)的表達及意義.pdf

1、本研究的目的是觀察ESC在體外向神經(jīng)細胞定向誘導分化及自由分化過程中，Notch-bHLH信號轉(zhuǎn)導系統(tǒng)主要成員Notch1、Mash1和NeuroD蛋白及mRNA的時空表達情況和意義，以探討ESC神經(jīng)分化的分子機制，為進一步增加ESC定向誘導分化的效率和可控性提供進一步的實驗依據(jù)，并為ESC眼內(nèi)移植和視網(wǎng)膜變性性疾病的細胞替代治療提供堅實的理論基礎。 結論：1.在體外，可不經(jīng)EB階段，應用RA直接將ESC誘導分化為神經(jīng)細胞，改良

2、的ESC誘導分化方法與傳統(tǒng)的RA4-/4+方法效果相同，可取代傳統(tǒng)方法。2.體外培養(yǎng)時間較短的P12 ESC有著高度的向神經(jīng)鏈系定向分化發(fā)育的可能性。隨著培養(yǎng)時間延長和傳代次數(shù)增多，Notch1信號逐漸下調(diào)，ESC自發(fā)分化的可能性增加，向神經(jīng)細胞定向分化的潛能有所下降。在應用ESC進行定向誘導分化和發(fā)育調(diào)控基因等研究時，應盡可能選擇體外培養(yǎng)時間短、傳代次數(shù)少、干細胞特性維持較好的細胞。3.在ESC向神經(jīng)細胞誘導分化及自由分化過程中均伴有

3、Notch1信號的逐漸關閉。Notch1可能在ESC干細胞特性的維持和向神經(jīng)細胞的特異性分化中起重要作用。RA促進Notch1的下調(diào)，與Notch1的相互作用可能也是RA誘導分化的機制之一。4.在ESC向神經(jīng)細胞的誘導分化及自由分化過程中，當Notch1信號開始逐漸關閉后，其下游bHLH家族成員Mash1、NeuroD迅速激活，使ESC有可能在局部微環(huán)境內(nèi)誘導因素的作用下向視網(wǎng)膜特異性神經(jīng)元，尤其是感光細胞分化發(fā)育。RA可以促進Mash