胚胎干細(xì)胞分化過程中Notch-bHLH信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)的表達(dá)及意義.pdf

1、本研究的目的是觀察ESC在體外向神經(jīng)細(xì)胞定向誘導(dǎo)分化及自由分化過程中，Notch-bHLH信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)主要成員Notch1、Mash1和NeuroD蛋白及mRNA的時(shí)空表達(dá)情況和意義，以探討ESC神經(jīng)分化的分子機(jī)制，為進(jìn)一步增加ESC定向誘導(dǎo)分化的效率和可控性提供進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，并為ESC眼內(nèi)移植和視網(wǎng)膜變性性疾病的細(xì)胞替代治療提供堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)。 結(jié)論：1.在體外，可不經(jīng)EB階段，應(yīng)用RA直接將ESC誘導(dǎo)分化為神經(jīng)細(xì)胞，改良

2、的ESC誘導(dǎo)分化方法與傳統(tǒng)的RA4-/4+方法效果相同，可取代傳統(tǒng)方法。2.體外培養(yǎng)時(shí)間較短的P12 ESC有著高度的向神經(jīng)鏈系定向分化發(fā)育的可能性。隨著培養(yǎng)時(shí)間延長和傳代次數(shù)增多，Notch1信號(hào)逐漸下調(diào)，ESC自發(fā)分化的可能性增加，向神經(jīng)細(xì)胞定向分化的潛能有所下降。在應(yīng)用ESC進(jìn)行定向誘導(dǎo)分化和發(fā)育調(diào)控基因等研究時(shí)，應(yīng)盡可能選擇體外培養(yǎng)時(shí)間短、傳代次數(shù)少、干細(xì)胞特性維持較好的細(xì)胞。3.在ESC向神經(jīng)細(xì)胞誘導(dǎo)分化及自由分化過程中均伴有

3、Notch1信號(hào)的逐漸關(guān)閉。Notch1可能在ESC干細(xì)胞特性的維持和向神經(jīng)細(xì)胞的特異性分化中起重要作用。RA促進(jìn)Notch1的下調(diào)，與Notch1的相互作用可能也是RA誘導(dǎo)分化的機(jī)制之一。4.在ESC向神經(jīng)細(xì)胞的誘導(dǎo)分化及自由分化過程中，當(dāng)Notch1信號(hào)開始逐漸關(guān)閉后，其下游bHLH家族成員Mash1、NeuroD迅速激活，使ESC有可能在局部微環(huán)境內(nèi)誘導(dǎo)因素的作用下向視網(wǎng)膜特異性神經(jīng)元，尤其是感光細(xì)胞分化發(fā)育。RA可以促進(jìn)Mash