農(nóng)達(dá)（41％草甘膦）對(duì)人L-02肝細(xì)胞損傷的研究.pdf

1、目的： 探討農(nóng)達(dá)(41％草甘膦)對(duì)人L-02肝細(xì)胞產(chǎn)生的損傷作用及其可能的機(jī)制。 方法： 體外試驗(yàn)(in vitro test)以L-02肝細(xì)胞為受試細(xì)胞，通過(guò)MTT法檢測(cè)不同濃度的農(nóng)達(dá)對(duì)L-02肝細(xì)胞存活率的影響，選擇細(xì)胞存活率為20％-80％的濃度進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。設(shè)置5個(gè)農(nóng)達(dá)處理組，60mg/L、90mg/L、120mg/L、150mg/L、180mg/L和1個(gè)陰性對(duì)照組(PBS)，農(nóng)達(dá)處理細(xì)胞時(shí)間為24h。L

2、-02肝細(xì)胞的形態(tài)學(xué)改變采用姬母薩染色法在光鏡下觀察結(jié)合透射電鏡觀察；農(nóng)達(dá)對(duì)L-02肝細(xì)胞膜通透性影響和細(xì)胞毒性作用采用谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)活性水平結(jié)合臺(tái)盼藍(lán)拒染法來(lái)評(píng)價(jià)；農(nóng)達(dá)誘導(dǎo)L-02肝細(xì)胞氧化損傷程度選用超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)含量等指標(biāo)評(píng)價(jià)；用線粒體跨膜電位(△ψm)檢測(cè)細(xì)胞線粒體損傷；用DNA條帶(DNA-Ladder)檢測(cè)肝細(xì)胞DNA損傷；以Annexin V-FI

3、TC/PI復(fù)染法測(cè)定細(xì)胞發(fā)生凋亡和壞死的情況；Western Blotting檢測(cè)對(duì)照組與90mg/L組細(xì)胞色素C(Cyt C)和凋亡誘導(dǎo)因子(AIF)表達(dá)水平。 結(jié)果： 1.在60-180mg/L的處理濃度范圍內(nèi)，能明顯引起L-02肝細(xì)胞存活率的降低(P<0.05)，處理濃度和細(xì)胞存活率之間存在負(fù)相關(guān)(r=-0.974)。 2.在光鏡下觀察姬母薩染色L-02肝細(xì)胞爬片，觀察到各農(nóng)達(dá)處理組L-02肝細(xì)胞皺縮或腫大

4、，形態(tài)由瓦片狀收縮為圓形，細(xì)胞間隙擴(kuò)大，細(xì)胞破裂，染色質(zhì)濃縮，貼壁細(xì)胞密度和數(shù)量減少。電鏡下觀察，可發(fā)現(xiàn)處理組細(xì)胞出現(xiàn)表面微絨毛消失，細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)不完整，細(xì)胞核碎裂或腫脹，線粒體空泡樣變等細(xì)胞凋亡或壞死的表現(xiàn)。 3.農(nóng)達(dá)處理L-02肝細(xì)胞，其活細(xì)胞臺(tái)盼蘭藍(lán)染比例升高(P<0.05)；細(xì)胞培養(yǎng)上清液中ALT活性增加(P<0.05)；從90mg/L組開(kāi)始AST活性增加(P<0.05)；農(nóng)達(dá)導(dǎo)致處理組細(xì)胞內(nèi)MDA的含量增加，SOD活性減

5、弱，GSH含量減少(P<0.05)；農(nóng)達(dá)導(dǎo)致120～180mg/L組細(xì)胞Nal+-K+ATP酶活性降低(P<0.05)。 4.農(nóng)達(dá)處理能誘導(dǎo)細(xì)胞DNA鏈斷裂，處理濃度在150mg/L、180mg/L，DNA受損程度嚴(yán)重；90mg/L組Cyt C和AIF表達(dá)水平高于對(duì)照組(P<0.05)；90mg/L組開(kāi)始用農(nóng)達(dá)處理的L-02細(xì)胞線粒體膜電位明顯降低(P<0.05)；農(nóng)達(dá)能明顯誘導(dǎo)處理組肝L-02細(xì)胞發(fā)生凋亡和壞死(P<0.05)