RhoGDI2在胰腺癌中的表達及其對胰腺癌生物學行為的影響.pdf

1、目的:鳥嘌呤核苷酸解離抑制因子2(Rho GDP dissociation inhibitor2,RhoGDI2)通過調節(jié)Rho鳥苷三磷酸酶(Rho GTPases)蛋白家族的分布及活性狀態(tài),從而調控著細胞分裂、細胞形態(tài)改變、細胞遷移、囊泡運輸、基因表達等過程。目前發(fā)現RhoGDI2在多種腫瘤中存在著異常表達,RhoGDI2通過多種機制調控腫瘤的侵襲與轉移,被認為是一個腫瘤轉移相關基因。然而RhoGDI2在胰腺癌中的表達及相應作用,卻缺

2、乏相應的實驗研究,本實驗旨在探討RhoGDI2在胰腺癌組織標本中的表達及其臨床意義,研究RhoGDI2在胰腺癌細胞株中的表達及其對胰腺癌細胞增殖、遷移、侵襲等生物學行為的影響,并尋找RhoGDI2調控的下游分子。
　　方法:(1)利用免疫組化技術檢測RhoGDI2在60對胰腺癌組織和相應癌旁組織中的表達,并分析RhoGDI2的表達與臨床病理因素的關系;(2)利用RT-PCR和Western blot檢測RhoGDI2和MMP2在3

3、0對新鮮胰腺癌組織及癌旁組織中的表達情況,分析兩者表達的相關性。(3)利用RT-PCR和Western blot檢測RhoGDI2在胰腺癌細胞株PANC-1、BxPC3、SW1990、Patu8988中的表達情況,將siRNA-RhoGDI2或siRNA-NC轉染到胰腺癌細胞株中,利用RT-PCR和Western blot確認RNAi靶向沉默RhoGDI2的效果。(4)沉默RhoGDI2表達后,利用體外增殖實驗(CCK-8法)、傷口愈合

4、實驗和侵襲實驗檢測胰腺癌細胞增殖能力、遷移能力和侵襲能力的改變.(5)沉默RhoGDI2表達后,利用RT-PCR和Western blot技術檢測各組胰腺癌細胞中MMP2的表達情況。
　　結果:(1)RhoGDI2在胰腺癌組織中的mRNA表達量明顯高于相應癌旁組織,RhoGDI2的mRNA相對表達量分別為0.661±0.021、0.199±0.023(P<0.05);免疫組化結果顯示,RhoGDI2在胰腺癌組織中的陽性率明顯高于癌

5、旁組織(P<0.05)。RhoGDI2的表達與臨床病理因素的分析結果顯示,RhoGDI2的表達與腫瘤大小、分化程度、腫瘤分期、淋巴結轉移及血管侵犯密切相關(P<0.05),而與性別、年齡、腫瘤部位無關(P>0.05)。(2)不論是mRNA還是蛋白質水平,RhoGDI2和MMP2在胰腺癌組織中的表達都明顯高于相應癌旁組織(P<0.05),Spearman相關分析數據顯示,RhoGDI2表達與MMP2的表達正相關(P<0.001),在mRN

6、A和蛋白質水平的Spearman相關系數分別為0.627、0.817。(3)RhoGDI2在PANC-1和Patu8988中表達,而在BxPC3和SW1990中不表達;RNAi技術沉默RhoGI2在PANC-1和Patu8988中的表達,蛋白抑制率分別為78.3％和82.4％。(4)沉默RhoGDI2在PANC-1和Patu8988中的表達后,PANC-1和Patu8988細胞的增殖能力無明顯改變(P>0.05,P>0.05),遷移和侵

7、襲能力明顯下降(P<0.05,P<0.05)(5)沉默RhoGDI2在PANC-1和Patu8988中的表達后,與陰性對照組相比,MMP2在PANC-1和Patu8988實驗組中的表達明顯受抑制(P<0.05,P<0.05)。
　　結論:RhoGDI2和MMP2在胰腺癌中高表達,兩者表達正相關,RhoGDI2的表達與腫瘤大小、分化程度、腫瘤分期、淋巴結轉移及血管侵犯密切相關。沉默RhoGDI2的表達后,胰腺癌細胞的遷移、侵襲能力明