MMP-11對(duì)胰腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及其診斷價(jià)值的初步研究.pdf

1、胰腺導(dǎo)管腺癌(pancreatic ductal adenocarcinoma，PDAC)是惡性程度最高的消化道腫瘤之一，其特點(diǎn)為發(fā)病隱匿、進(jìn)展迅速、手術(shù)切除率低、放化療效果不佳，故早期診斷困難、預(yù)后極差。因此，提高胰腺癌的早期診斷率，改善治療效果，并深入了解胰腺癌發(fā)生發(fā)展的相關(guān)機(jī)制，是目前研究的熱點(diǎn)。
　　基質(zhì)金屬蛋白酶是一個(gè)龐大的蛋白酶家族，基質(zhì)金屬蛋白酶-11(MMP-11，stromelysin-3)則是其中的一員。不同于

2、基質(zhì)金屬蛋白酶的經(jīng)典功能，目前暫未發(fā)現(xiàn)MMP-11可以降解細(xì)胞外基質(zhì)(Extracellular matrix，ECM)的主要成分，且MMP-11在胞內(nèi)已活化，故提示其功能的特殊性。MMP-11與腫瘤關(guān)系密切。早期研究觀察到MMP-11主要表達(dá)于癌旁成纖維細(xì)胞中;而近年對(duì)多種腫瘤組織進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)某些腫瘤細(xì)胞自身高表達(dá)MMP-11，其中包括胰腺癌細(xì)胞。在臨床意義方面，一些研究發(fā)現(xiàn)腫瘤患者的血清MMP-11水平升高，且發(fā)現(xiàn)腫瘤組織中MMP

3、-11高表達(dá)與預(yù)后相關(guān)。此外一些體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，MMP-11的表達(dá)水平與腫瘤的生物學(xué)行為相關(guān)，然而一些結(jié)果存在矛盾及爭(zhēng)議，結(jié)論仍不明確?；贛MP-11的特殊性，以及MMP-11對(duì)胰腺癌生物學(xué)行為的影響及相關(guān)機(jī)制不明確，胰腺癌患者血清MMP-11水平與其臨床特征之間的關(guān)系未知，我們開(kāi)展了此項(xiàng)研究。本研究中將通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)、血清MMP-11水平檢測(cè)，初步探索MMP-11對(duì)胰腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響，并探索其臨床意義。
　　研究目的

4、：
　　1.明確MMP-11在胰腺癌細(xì)胞中的表達(dá)水平及表達(dá)部位;
　　2.探索MMP-11對(duì)胰腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響;
　　3.檢測(cè)胰腺疾病患者及健康受試者血清中MMP-11的表達(dá)水平，并初步探索其對(duì)于胰腺癌診斷及鑒別診斷的意義。
　　研究方法：
　　1.使用Western blot及Quantitative Real-time PCR技術(shù)檢測(cè)人胰腺癌細(xì)胞株中MMP-11的基礎(chǔ)表達(dá)水平;通過(guò)免疫熒光染色明

5、確MMP-11在胰腺癌細(xì)胞中的表達(dá)水平及分布。
　　2.使用脂質(zhì)體法對(duì)人胰腺癌細(xì)胞株MiaPaCa-2和AsPC-1進(jìn)行siRNA轉(zhuǎn)染，下調(diào)細(xì)胞內(nèi)MMP-11的表達(dá)水平，并采用Western blot及Quantitative Real-time PCR進(jìn)行驗(yàn)證;使用CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力;使用Transwell法檢測(cè)細(xì)胞的遷移、侵襲能力;使用流式細(xì)胞術(shù)對(duì)細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期情況進(jìn)行檢測(cè);并通過(guò)Western blot檢測(cè)上述

6、細(xì)胞生物學(xué)行為相關(guān)蛋白表達(dá)水平的變化。
　　3.收集胰腺疾?。òㄒ认賹?dǎo)管腺癌、胰腺神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤、胰腺囊性腫瘤、慢性胰腺炎）患者以及健康受試者的血清樣本，通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)法檢測(cè)血清中MMP-11濃度。
　　研究結(jié)果：
　　1.MMP-11在人胰腺癌細(xì)胞株AsPC-1、MiaPaCa-2、Panc-1、Su-86.86和T3M4中均有表達(dá)，其中P anc-1、AsPC-1、MiaPaCa-2表達(dá)水平較

7、高。
　　2.MMP-11在胰腺癌細(xì)胞中幾乎均位于胞漿/漿膜，而幾乎不分布于胞核中。
　　3.MMP-11可以促進(jìn)胰腺癌細(xì)胞的增殖及遷移、侵襲，但未觀察到MMP-11可以影響胰腺癌細(xì)胞的凋亡和吉西他濱化療的敏感性。
　　4.MMP-11影響腫瘤細(xì)胞增殖的機(jī)制可能是MMP-11通過(guò)促進(jìn)Akt的磷酸化，調(diào)控了CyclinD1和CDK4的表達(dá)，從而促進(jìn)細(xì)胞周期中的G1/S轉(zhuǎn)換。
　　5.MMP-11在健康人群及多種胰腺

8、腫瘤中均有表達(dá)。健康受試者血清MMP-11水平顯著低于各胰腺疾病患者;胰腺癌患者血清MMP-11水平顯著高于健康受試者和胰腺囊性/囊實(shí)性腫瘤患者。
　　6.血清MMP-11水平在鑒別胰腺癌患者與健康人群、以及鑒別胰腺癌患者與胰腺囊性/囊實(shí)性腫瘤患者之間有較好的敏感性及特異性。
　　研究結(jié)論：
　　1.胰腺癌細(xì)胞中廣泛表達(dá)MMP-11，其在細(xì)胞中促進(jìn)增殖、遷移和侵襲，發(fā)揮促癌作用。
　　2.胰腺癌及其他胰腺疾病患者