miR-31表達的抑制對胰腺癌panc-1細胞生物學行為的影響及其機制的初步探索.pdf

1、目的:采用RNA干擾技術轉染胰腺癌Panc-1細胞系,觀察抑制miR-31的表達對Panc-1細胞系增殖、凋亡、愈合能力、遷移及侵襲等能力的影響,探討miR-31表達的抑制對胰腺癌 panc-1細胞各種生物學行為的影響,并通過作用靶點的預測和靶蛋白的檢測,來初步預測miR-31調控panc-1細胞活動的機制,為進一步探索miR-31影響胰腺癌細胞各生物學行為的可能作用機制作基礎,以服務于胰腺癌發(fā)病機制及治療方法的研究。
　　方法:

2、①設計制備針對miR-31的抑制子inhibitor,以脂質體(lipofectamineTM2000)為載體轉染人胰腺癌細胞系Panc-1;②采用RT-PCR以檢測miR-31 inhibitor轉染后胰腺癌細胞系panc-1細胞miR-31在mRNA表達情況,驗證miR-31的抑制效果,同時設計陽性對照組;③分別采用四甲基偶氮唑藍(MTT)法檢測計算空白組、轉染組細胞及陽性對照組的吸光度值檢測細胞增殖能力的變化、劃痕實驗檢測細胞愈合

3、能力、transwell遷移和侵襲實驗檢測細胞遷移和侵襲能力的變化等,觀察miR-31的表達對Panc-1細胞的影響;④利用靶基因預測網(wǎng)站對miR-31靶基因進行預測,篩選相關靶基因,通過western blot驗證相關靶蛋白的表達情況,初步預測miR-31相關作用機制。
　　結果:①細胞數(shù)約為每孔1.5×105個、siRNA為100pmol,Lipofectamine2000與siRNA比例為5ul:5ul(6孔板)時,有最佳的

4、轉染效率(90.6％),繼續(xù)提高siRNA濃度并不能明顯提高轉染效率;②轉染miR-31 inhibitors后轉染組細胞Panc-1的mRNA表達明顯下降(p<0.05);③轉染了miR-31 inhibitors的panc-1細胞創(chuàng)傷愈合能力、侵襲能力、遷移能力均明顯下降(p<0.05),但對增殖和凋亡能力的影響沒有統(tǒng)計學差異(p>0.05);④所選靶蛋白中,RhoBTB1蛋白升高最為明顯。
　　結論:①抑制miR-31的表達