RIP1在對(duì)乙酰氨基酚誘導(dǎo)AIF依賴性肝細(xì)胞程序性壞死中的作用.pdf

1、目的：過量對(duì)乙酰氨基酚(APAP)可誘導(dǎo)細(xì)胞死亡誘導(dǎo)因子(AIF)依賴性肝細(xì)胞死亡,但作用機(jī)制還不清楚。本研究探討了在對(duì)乙酰氨基酚誘發(fā)小鼠急性肝損傷的過程中,程序性壞死關(guān)鍵調(diào)控因子受體相互作用蛋白激酶1(RIP1)在 AIF介導(dǎo)肝細(xì)胞死亡中的作用。
　　方法：(1)為探討GSH耗竭對(duì)APAP誘導(dǎo)肝臟RIP1和RIP3上調(diào)的影響,將小鼠統(tǒng)一禁食12 h后進(jìn)行腹腔注射APAP(300 mg/kg),分別在不同的時(shí)點(diǎn)(0、1、2和4 h

2、)取材,檢測(cè)肝臟RIP1與RIP3的水平、GSH含量和腫瘤壞死因子(TNF-α)的mRNA水平。(2)為探討 RIP1選擇性抑制劑 Nec-1預(yù)處理和后處理對(duì) APAP誘導(dǎo)急性肝損傷的影響,將小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、Nec-1組、APAP組和APAP+Nec-1組,在給予APAP前或后30 min腹腔注射Nec-1(0.125 mg/mouse),分別在4 h和24 h取材,檢測(cè)血清中 ALT的水平和肝細(xì)胞死亡情況。(3)為探討Nec-1對(duì)

3、APAP在肝臟代謝中的效應(yīng),將小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、Nec-1組、APAP組、APAP+Nec-1組,在給予APAP前30 min進(jìn)行Nec-1預(yù)處理,30 min后取材,檢測(cè)肝臟的GSH含量和CYP2E1水平。(4)為探討Nec-1對(duì)APAP誘導(dǎo)肝臟JNK磷酸化、線粒體 Bax和細(xì)胞核 AIF的轉(zhuǎn)位的影響,將小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、Nec-1組、APAP組和APAP+Nec-1組,在給予APAP前30 min進(jìn)行Nec-1預(yù)處理,4 h后進(jìn)

4、行取材,檢測(cè)肝臟的JNK磷酸化水平、線粒體Bax水平和細(xì)胞核AIF的轉(zhuǎn)位情況。(5)為探討Nec-1是否通過其抗氧化活性來阻止APAP誘導(dǎo)的肝細(xì)胞死亡,將小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、APAP組、APAP+Nec-1組和APAP+Nec-1+BSO組,在給予APAP前30 min,APAP+Nec-1組進(jìn)行Nec-1預(yù)處理,在給予Nec-1前進(jìn)行BSO(25 mg/kg)預(yù)處理,4 h后進(jìn)行取材,檢測(cè)血清中ALT的水平、肝臟的3-NT水平、GSH

5、含量、細(xì)胞核AIF的轉(zhuǎn)位和肝細(xì)胞死亡情況。
　　結(jié)果：RIP1選擇性抑制劑Nec-1可阻止APAP誘導(dǎo)的肝細(xì)胞死亡,能夠改善小鼠的生存率。肝細(xì)胞RIP1的水平在APAP處理1 h后顯著升高,且與肝細(xì)胞GSH耗竭相關(guān)。但是,Nec-1預(yù)處理并沒有影響在給予APAP30 min后肝臟的GSH水平,且 Nec-1預(yù)處理并沒有影響到早期肝臟 CYP2E1的表達(dá)。此外,Nec-1明顯抑制APAP誘導(dǎo)JNK激活,表明JNK是RIP1的下游靶點(diǎn)

6、。Nec-1可明顯抑制APAP誘導(dǎo)胞質(zhì)Bax向線粒體轉(zhuǎn)位。同時(shí),Nec-1完全阻斷APAP誘導(dǎo)的AIF從線粒體向細(xì)胞核轉(zhuǎn)位。在Nec-1對(duì)細(xì)胞內(nèi)GSH水平的作用完全被BSO所取消后,Nec-1仍然能夠阻止APAP誘導(dǎo)的ALT水平的升高,仍明顯地阻止APAP誘導(dǎo)的細(xì)胞核AIF的轉(zhuǎn)位和肝細(xì)胞死亡。
　　結(jié)論：本研究結(jié)果表明肝臟 RIP1的激活是 APAP誘導(dǎo)小鼠急性肝衰竭的早期事件。RIP1選擇性抑制劑Nec-1預(yù)處理和后處理均對(duì)AP