雙黃連對(duì)犬肝細(xì)胞對(duì)乙酰氨基酚損傷的保護(hù)作用.pdf

1、雙黃連由金銀花、黃芩、連翹3味中藥組成,具有清熱解毒、辛涼解表等功效。藥物進(jìn)入動(dòng)物機(jī)體后,要在酶的參與下進(jìn)行分解、代謝。參與藥物代謝的酶主要是細(xì)胞色素P450酶系,它主要存在于肝臟的微粒體中。
　　 目的:建立分離及培養(yǎng)犬原代肝細(xì)胞的方法,并通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)探討雙黃連及各單味藥物相互作用的分子機(jī)理以及其對(duì)肝損傷的保護(hù)作用,為臨床合理用藥提供理論依據(jù)。
　　 方法:通過(guò)膠原酶兩步灌流法獲取犬肝細(xì)胞,用含多種輔助因子的Willi

2、ams’E培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng),每天觀察肝細(xì)胞的生長(zhǎng)情況,并進(jìn)行圖像采集。同時(shí)用對(duì)乙酰氨基酚(AP)來(lái)制備肝細(xì)胞損傷模型,收集不同時(shí)段細(xì)胞培養(yǎng)上清液,MTT法測(cè)定肝細(xì)胞的存活率,分光光度法測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)液中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、丙二醛(MDA)及乳酸脫氫酶(LDH)的含量,用不同濃度的雙黃連及各單味藥處理?yè)p傷的犬肝細(xì)胞24-48h,Westen-blot法檢測(cè)犬肝細(xì)胞中CYP450的表達(dá)。
　　 結(jié)果:通過(guò)膠原酶兩

3、步灌流法,每只犬可獲得肝細(xì)胞7.2×109個(gè),用臺(tái)盼藍(lán)排除法檢測(cè)到6.81×109個(gè)活細(xì)胞,成活率高達(dá)94.6％。培養(yǎng)的肝細(xì)胞形態(tài)完整、生長(zhǎng)良好,可用于藥物代謝的研究。16mM AP是致體外培養(yǎng)肝細(xì)胞損傷的最適濃度。不同濃度的雙黃連處理?yè)p傷的犬肝細(xì)胞后,作用24h時(shí)CYP450的表達(dá)呈升高趨勢(shì),但在藥物濃度達(dá)到25mM的時(shí)候CYP450的表達(dá)呈降低趨勢(shì)；48h時(shí)CYP450的表達(dá)隨雙黃連濃度的增加而呈降低趨勢(shì),1mM、2mM與5mM組對(duì)