水飛薊對大鼠肝細胞醋氨酚損傷的保護作用.pdf

1、藥源性肝損傷在畜禽生產中造成的的危害越來越大，嚴重阻礙著畜禽養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。醋氨酚(又名對乙酰氨基酚，簡稱AP)是臨床應用極為廣泛的解熱鎮(zhèn)痛藥，但在過量情況下，嚴重損害肝臟，造成藥物性肝炎或者重癥肝炎。藥理和毒理研究中，常常應用醋氨酚制備藥物性肝損傷模型，研究藥物性肝損傷的機制。 本文利用膠原酶兩步灌流法獲取的SD大鼠原代肝細胞作為研究對象，用不同劑量的醋氨酚處理，MTT 法測定肝細胞的存活率，分光光度法測定培養(yǎng)上清液中谷丙轉氨酶

2、(ALT)、一氧化氮(NO)和肝細胞內的丙二醛(MDA)含量，免疫印跡法測定大鼠肝細胞細胞色素酶P450 2E1(CYP 2E1)的表達水平。結果顯示，AP處理后，肝細胞存活率降低：16mM AP時，肝細胞存活率呈直線下降趨勢；20mM AP作用24h，肝細胞存活率降低到70％左右。ALT、AST含量升高：處理12h，10mM、16mM組ALT、AST含量極顯著升高；處理24h，4mM、10mM、16mM AP組NO含量與對照組之間存在

3、極顯著的統(tǒng)計學意義。LDH含量顯著升高。CYP 2E1的表達水平隨AP濃度的升高而增強，20mM AP處理時CYP 2E1的表達水平均低于16mM AP組。MDA變化不明顯。 通過以上實驗，選用16mM AP處理大鼠原代肝細胞，制備體外肝細胞損傷模型，不同劑量的水飛薊有效成分作用于該模型，用上述測定方法，比較水飛薊有效成分的保肝程度，探求各種有效成分的最佳體外保肝濃度。結果顯示，水飛薊有效成分在體外均能提高肝細胞的存活率，其中水

4、飛薊寧接近于N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine，NAC)的水平；各有效成分能降低ALT、AST的含量，與MTT結果存在一定的相關性；NO含量降低，但各組之間不存在統(tǒng)計學意義；CYP2E1的表達程度升高。其中體外保肝的最佳濃度為：1、5μM水飛薊寧，5μM水飛薊賓，0.5、1、5、10μM水飛薊亭，20、50 μg/L水飛薊醇提物。水飛薊的三種有效成分在各自的最佳濃度下保肝作用比較，水飛薊寧最強，水飛薊亭次之，水飛薊賓最弱