RIP1促進(jìn)順鉑誘導(dǎo)食管癌細(xì)胞凋亡及其機(jī)制研究.pdf

1、背景和目的:
　　食管癌是常見的消化道惡性腫瘤之一，發(fā)病率居世界第八位；癌癥相關(guān)死亡率居第六位。我國是食管癌高發(fā)國家之一，死亡率居第四位，以鱗狀細(xì)胞癌多見，且多數(shù)食管癌患者出現(xiàn)癥狀且確診時(shí)已屬中晚期，并傾向于早期轉(zhuǎn)移，食管癌的療效及預(yù)后欠佳。所以，發(fā)現(xiàn)使食管癌對(duì)治療敏感性增強(qiáng)的因素很重要。近年來研究的RIP1含有一個(gè)C末端死亡結(jié)構(gòu)域，一個(gè)N末端絲氨酸/蘇氨酸激酶。目前RIP1在食管癌細(xì)胞的凋亡、增殖及治療敏感性的作用尚不清楚。該課

2、題研究RIP1對(duì)DDP誘導(dǎo)的食管癌細(xì)胞凋亡的影響，并對(duì)其機(jī)制進(jìn)行初步探討。
　　方法:
　　常規(guī)體外培養(yǎng)細(xì)胞，DDP處理KYSE510和KYSE410食管鱗癌細(xì)胞株，MTS法檢測(cè)不同濃度DDP對(duì)KYSE510、KYSE410細(xì)胞的增殖抑制作用，Annexin V/PI雙染流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)DDP處理后兩株食管鱗癌細(xì)胞的凋亡率，Western blot檢測(cè)DDP處理前后食管癌細(xì)胞中RIP1、caspase-3、PARP、JNK、p

3、-JNK的蛋白表達(dá)水平，實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)RIP1mRNA的水平。流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞線粒體膜電位變化，Nec-1聯(lián)合DDP處理兩株細(xì)胞前后凋亡率、ROS在KYSE510細(xì)胞中的變化。siRNA特異性沉默RIP1，Western blot檢測(cè)沉默后RIP1蛋白水平，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)沉默RIP1后DDP處理KYSE510細(xì)胞的凋亡率，Western blot檢測(cè)沉默RIP1后DDP處理食管癌KYSE510細(xì)胞中caspase-3、PARP

4、、JNK、p-JNK的蛋白水平。
　　結(jié)果:
　　DDP誘導(dǎo)食管癌細(xì)胞凋亡具有劑量和時(shí)間相關(guān)性，KYSE510和KYSE410細(xì)胞對(duì)DDP的IC50分別為(5.021±0.069)μg/ml、(40.169±0.302)μg/ml，后者是前者的8倍，相比有顯著性差異(P<0.01)。凋亡率隨DDP劑量增加和時(shí)間延長(zhǎng)升高，RIP1蛋白的表達(dá)升高，KYSE510的mRNA水平表達(dá)較KYSE410高。相同劑量的DDP作用于兩株食管

5、癌細(xì)胞，KYSE510細(xì)胞中caspase-3、PARP、p-JNK活化明顯，而KYSE410細(xì)胞則變化不大。Nec-1聯(lián)合DDP處理兩株細(xì)胞，KYSE510細(xì)胞凋亡率減少，線粒體膜電位較對(duì)照組下降，ROS產(chǎn)生較多。siRNA轉(zhuǎn)染沉默RIP1后，促進(jìn)了 KYSE510細(xì)胞的增殖，KYSE510細(xì)胞凋亡率減少，明顯低于陰性對(duì)照組。siRNA轉(zhuǎn)染沉默RIP1后，KYSE510細(xì)胞中RIP1、p-JNK蛋白表達(dá)明顯下降。
　　結(jié)論: