DR5在阿司匹林誘導(dǎo)食管癌細(xì)胞凋亡中的作用及機(jī)制.pdf

1、背景:
　　 阿司匹林，又名乙酰水楊酸，為解熱鎮(zhèn)痛藥，其主要功能是消炎解痛和抗血栓。研究發(fā)現(xiàn)小劑量長期服用阿司匹林可以明顯降低多種癌癥的發(fā)病率。多次體外試驗證明：阿司匹林可以抑制多種腫瘤細(xì)胞的生長，促進(jìn)其凋亡。動物實驗及流行病學(xué)研究也發(fā)現(xiàn)阿司匹林有一定的抗腫瘤作用。其作用機(jī)制目前尚未完全闡明。死亡受體5(death receptor5，DR5)是TNF相關(guān)的凋亡誘導(dǎo)配體(TNF-relatedapoptosis inducing

2、 ligand，TRAIL)的受體，在一些細(xì)胞的凋亡中發(fā)揮作用，是一個重要的抗腫瘤靶點(diǎn)。食管癌是河南省常見的地方性腫瘤，其預(yù)防及治療一直是腫瘤研究熱點(diǎn)。本文從DR5方面對阿司匹林誘導(dǎo)人食道癌細(xì)胞凋亡活性及作用機(jī)制進(jìn)行研究，以期為DR5配體及阿司匹林的抗腫瘤應(yīng)用提供指導(dǎo)。
　　 目的：
　　 觀察阿司匹林對人食道癌EC9706細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)活性，并從DR5方面探討阿司匹林誘導(dǎo)人食道癌細(xì)胞凋亡的作用機(jī)制。
　　 方法

3、：
　　 MTT法檢測阿司匹林對食道癌細(xì)胞生長的抑制作用；免疫組化技術(shù)檢測DR5的表達(dá)及分布的影響；通過觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化、及瓊脂糖凝膠電泳分析DNA降解檢測阿司匹林對食道癌細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)作用。流式細(xì)胞儀檢測人食道癌細(xì)胞膜DR5表達(dá)、細(xì)胞凋亡率、食道癌細(xì)胞線粒體膜電位以及鈣離子的變化。Western blotting檢測阿司匹林作用后食道癌細(xì)胞凋亡蛋白改變，即凋亡信號途徑的caspase的激活。
　　 結(jié)果：
　　

4、 1.MTT法檢測顯示，不同濃度的阿司匹林作用食道癌EC9706細(xì)胞12小時對食管癌細(xì)胞具有生長抑制作用。而阿司匹林在同樣濃度和作用時間下對食道上皮細(xì)胞NEC及DR5沉默的食管癌細(xì)胞生長的抑制作用則較弱。
　　 2.在倒置顯微鏡下所見，經(jīng)阿司匹林作用12小時，EC9706細(xì)胞呈現(xiàn)細(xì)胞凋亡的形態(tài)特征，但是對食管上皮細(xì)胞NEC及DR5沉默的食管癌細(xì)胞影響較小。流式細(xì)胞術(shù)分析也顯示，阿司匹林作用后食道癌EC9706細(xì)胞發(fā)生凋亡，并增

5、強(qiáng)食管癌細(xì)胞對抗DR5功能性抗體誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的敏感性。
　　 3.免疫組化顯示，阿司匹林作用后食道癌EC9706細(xì)胞內(nèi)DR5表達(dá)增強(qiáng)，呈顆粒狀，主要分布細(xì)胞質(zhì)中；流式細(xì)胞術(shù)分析顯示，阿司匹林作用后食道癌EC9706細(xì)胞膜DR5表達(dá)增強(qiáng)。
　　 4.流式細(xì)胞術(shù)分析顯示，阿司匹林作用后食道癌EC9706細(xì)胞膜線粒體膜電位未發(fā)生改變，但是細(xì)胞內(nèi)鈣離子和ROS濃度增大。
　　 5.Western blotting結(jié)果顯示