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文檔簡介
1、目的:
觀察 HepG2.2.15細胞在不同濃度葡萄糖培養(yǎng)基條件下 HBsAg及HBeAg的表達差異,并探討其表達是否與PGC-1a相關(guān),初步研究乙肝病毒與代謝之間的關(guān)系。
方法:
1)本實驗通過體外培養(yǎng)HepG2.2.15細胞,MTT法檢測不同濃度葡萄糖培養(yǎng)基對HepG2.2.15細胞生長率影響。
2)ELISA法分別檢測各組培養(yǎng)細胞上清液中HBsAg、HBeAg的表達量。
3)熒光定
2、量 PCR檢測不同葡萄糖濃度培養(yǎng)基下各組細胞 PGC-1a mRNA的表達差異。
結(jié)果:
1)MTT法檢測不同葡萄糖濃度培養(yǎng)基對 HepG2.2.15細胞生長率影響:高糖組(35mmol/L)葡萄糖培養(yǎng)基抑制細胞生長。除高糖組(35mmol/L)外,HepG2.2.15細胞在培養(yǎng)24h與48h時各濃度組細胞與正常組比較差異無顯著性(P>0.05)。但在培養(yǎng)72h時,低糖組(2mmol/L)及無糖組細胞生長出現(xiàn)不同程度
3、的抑制(P<0.05)。
2)HBsAg及HBeAg的動態(tài)變化:HepG2.2.15表達HBsAg在72h時出現(xiàn)高峰,HBeAg的高峰出現(xiàn)在96h。在48小時可以觀察到兩種蛋白的表達量已達到接近高峰。
3)觀察不同葡萄糖濃度HepG2.2.15表達HBsAg、HBeAg的量:低糖組(2mmol/L)及無糖組細胞表達HBsAg、HBeAg量分別為(2.474±0.118、2.458±0.135)及(2.667±0.12
4、9、2.603±0.179)較正常組(1.450±0.220、1.486±0.186)高,并且差異有顯著性(P<0.01)。低糖組(2mmol/L)與無糖組兩兩比較差異無顯著性(P>0.05)。而15mmol/L、25mmol/L組與正常組比較差異無顯著性(P>0.05)。
4)定量PCR檢測不同葡萄糖濃度培養(yǎng)下各細胞中PGC-1amRNA表達差異:HepG2.2.15細胞在低糖組(2mmol/L)及無糖組PGC-1amRNA
5、表達量分別為(1.584±0.134、1.312±0.199)較正常組(0.930±0.123)高,并且差異有顯著性(P<0.05),低糖(2mmol/L)及無糖組之間差異也有顯著性(P<0.05)。而15mmol/L、25mmol/L組與正常組比較無明顯差異(P>0.05)。
結(jié)論:
1)低糖可能增強HBV表達HBsAg及HBeAg。
2)低糖改變時能促進PGC-1a的表達量。
3)低糖可能通過
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