不同濃度葡萄糖、胰島素對Colon26腫瘤細(xì)胞分泌IL-6的影響.pdf

1、目的：在糖尿病的自然病程中血漿葡萄糖和胰島素濃度的異常往往是同時存在的，觀察不同濃度葡萄糖和胰島素對Colon26腫瘤細(xì)胞分泌IL-6蛋白的影響及二者之間是否存在相互作用，以探討葡萄糖、胰島素經(jīng)IL-6途徑在小鼠結(jié)腸癌發(fā)生發(fā)展中的作用。 方法：所有實驗均在體外培養(yǎng)的小鼠Colon26腫瘤細(xì)胞上進(jìn)行。根據(jù)所用培養(yǎng)液含葡萄糖、胰島素濃度的不同，實驗所用細(xì)胞共分12組A組RPMI1640培養(yǎng)液(對照組)；B組RPMI1640+5mmo

2、l/L葡萄糖；C組RPMI1640+10mmol/L葡萄糖；D組RPMI1640+25mmol/L葡萄糖；E組RPMI1640+5uIU/ML胰島素；F組RPMI1640+25uIU/MI胰島素；G組RPMI1640+125uIU/ML，胰島素；H組RPMI1640+5mmol/L葡萄糖+5uIU/ML胰島素；K組RPMI1640+5mmol/L葡萄糖+125uIU/ML胰島素；L組RPMI1640+25mmol/L葡萄糖+125uIU

3、/ML胰島素；M組RPMI1640+25mmol/L葡萄糖+5uIU/ML胰島素；N組RPMI1640+25mmol/L葡萄糖+1.25uIU/ML胰島素。每種處理因素設(shè)3個復(fù)孔，培養(yǎng)48小時后收集培養(yǎng)液上清，ELISA法測IL-6蛋白濃度，收集細(xì)胞后抽提總RNA，RT-PCR同時擴(kuò)增IL-6和內(nèi)參照β-action目的片段，瓊脂糖凝膠電泳分離擴(kuò)增產(chǎn)物。整個實驗過程在合適的時間重復(fù)兩次。統(tǒng)計學(xué)分析采用采用t檢驗和單因素方差分析，顯著性標(biāo)

4、準(zhǔn)為P<0.05。 結(jié)果： 1.不同濃度的葡萄糖和胰島素對Colon26腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清IL-6蛋白分泌的影響 1.1不同濃度的葡萄糖對Colon26腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-6蛋白濃度的影響。D組(培養(yǎng)液含有25mmol/L的葡萄糖)上清中IL-6蛋白濃度(27.70±1.53)明顯高于A組(18.33±2.52)，差異有顯著性；而B組、C組(培養(yǎng)液分別含有5mmol/L，10mmol/L的葡萄糖)上清中IL-6

5、蛋白濃度(19.33±2.31，22.67±0.58)與A組相比無顯著性差別。 1.2不同濃度的胰島素對Colon26腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-6蛋白濃度的影響。E、F、G組(培養(yǎng)液中分別含有5uIU/mL、25uIU/mL、125uIU/mL 胰島素)上清中IL-6蛋白濃度(19.67±1.53，21.33±4.04，21.67±2.08)與A組相比無顯著性差別。 1.3不同濃度的葡萄糖、胰島素對Colon26腫瘤細(xì)胞培

6、養(yǎng)上清中IL-6蛋白濃度的影響。L、M、N組(培養(yǎng)液均含有25 mmol/L的葡萄糖)上清中IL-6蛋白濃度(27.67±2.52，27.33±2.08，27.33±1.53)均明顯高于A組，差異有顯著性，而H、K組(培養(yǎng)液均含有5mmol/L葡萄糖)的IL-6蛋白濃度(20.33±1.53，22.33±2.08)與A組相比無顯著性差別。 2.不同濃度的葡萄糖和胰島素對Colon26腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-6mRNA表達(dá)的影響

7、 2.1不同濃度的葡萄糖對Colon26腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-6mRNA表達(dá)的影響。D組(培養(yǎng)液含有25mmol/L的葡萄糖)上清中IL-6mRNA表達(dá)(0.560±0.011)明顯高于A組(0.406±0.012)，差異有顯著性；而B組、C組(培養(yǎng)液分別含有5mmol/L，10mmol/L的葡萄糖)上清中IL-6mRNA表達(dá)(0.413±0.031，0.426±0.001)與A組相比無顯著性差別。 2.2不同濃度的胰島

8、素對Colon26腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-6mRNA表達(dá)的影響。E、F、G組(培養(yǎng)液中分別含有5uIU/mL、25uIU/mL、125uIU/mL胰島素)上清中IL-6mRNA表達(dá)分別(0.416±0.002，0.422±0.013,0.426±0.016)與A組(0.406±0.012)相比無顯著性差別。 2.3不同濃度的葡萄糖、胰島素對Colon26腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-6mRNA表達(dá)的影響。L、M、N組(培養(yǎng)液均含有25

9、 mmol/L的葡萄糖)上清中IL-6蛋白濃度(0.560±0.011,0.560±0.011,0.563±0.002)均明顯高于A組，差異有顯著性，而H、K組(培養(yǎng)液均含有5mmol/L葡萄糖)的IL-6蛋白濃度(0.420±0.001，0.426±0.002)與A組相比無顯著性差別。 結(jié)論： 1.高濃度葡萄糖能夠增加Colon26腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清IL-6蛋白的分泌和IL-6mRNA的表達(dá)。高濃度的葡萄糖在轉(zhuǎn)錄水平影響