高濃度葡萄糖對(duì)體外培養(yǎng)的人晶狀體上皮細(xì)胞及其ILK表達(dá)的影響.pdf

1、研究背景：
　　白內(nèi)障是多種原因引起晶狀體混濁，從而導(dǎo)致視力障礙，影響人類視覺質(zhì)量的一種嚴(yán)重疾病。糖性白內(nèi)障是白內(nèi)障中的重要一類，隨著糖尿病病人的逐年增加，糖尿病性白內(nèi)障也呈上升趨勢(shì)，糖性白內(nèi)障已經(jīng)成為一個(gè)熱門的研究課題。
　　整合素連接激酶(integrin-linked kinase ILK)是一種絲氨酸/蘇氨酸素激酶，具有多種生物學(xué)活性的信號(hào)通路中的整合素受體的細(xì)胞效應(yīng)分子，參與了生物體內(nèi)多種信號(hào)通路，包括整合素、生長

2、因子和Wnt信號(hào)傳導(dǎo)通路，在細(xì)胞外基質(zhì)介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)中發(fā)揮重要作用。它通過與整合素β亞單位結(jié)合與整合素共同介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的連接，影響細(xì)胞外信號(hào)向下游的傳遞，對(duì)細(xì)胞的生長、分化、移行、凋亡、粘附、增殖以及細(xì)胞周期等進(jìn)行調(diào)控。在腫瘤、腎纖維化等研究方面ILK得到了廣泛關(guān)注。
　　ILK在糖尿病引起的并發(fā)癥中的作用正得到越來越多的重視。在糖尿病腎病方面的研究發(fā)現(xiàn)，糖尿病患者的腎小球中，ILK在腎小球系膜中表達(dá)增高，可能與腎小球的纖

3、維化有關(guān);在高濃度葡萄糖作用下小鼠的腎小球系膜細(xì)胞ILK的表達(dá)增高，酶活性增強(qiáng)；短時(shí)間的高糖暴露使人腎小球系膜細(xì)胞中ILK表達(dá)增高，PKB/Akt磷酸化水平增加，抑制了高糖應(yīng)激引起的細(xì)胞凋亡。在糖尿病大鼠的視網(wǎng)膜上也發(fā)現(xiàn)ILK的表達(dá)增高。
　　糖尿病患者的白內(nèi)障發(fā)生率高于年齡相關(guān)性白內(nèi)障,發(fā)病年齡較年齡相關(guān)性白內(nèi)障患者提前，白內(nèi)障術(shù)后后囊渾濁的發(fā)生率也高于年齡相關(guān)性白內(nèi)障患者。研究發(fā)現(xiàn)ILK在大鼠的晶狀體上皮細(xì)胞和晶狀體纖維細(xì)胞、

4、在人晶狀體上皮細(xì)胞中均有表達(dá)。由于ILK對(duì)細(xì)胞的增生、分化、存活、凋亡以及上皮細(xì)胞向間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化等方面起重要的調(diào)控作用，那么在高糖刺激下晶狀體上皮細(xì)胞ILK表達(dá)有無變化，這種變化是否參與糖尿病性白內(nèi)障發(fā)生、是否促使后發(fā)性白內(nèi)障的形成是我們感興趣的問題。
　　然而目前還沒有關(guān)于ILK及其相關(guān)信號(hào)分子在糖尿病白內(nèi)障病變中生物學(xué)功能的研究。我們利用體外培養(yǎng)的人晶狀體上皮細(xì)胞，觀察高糖引起的ILK及α-SMA的變化以及對(duì)細(xì)胞增生活力的影

5、響。闡明ILK對(duì)糖尿病白內(nèi)障病變進(jìn)展的可能的調(diào)控作用。
　　目的：
　　探討ILK在高濃度葡萄糖體外培養(yǎng)的人晶狀體上皮細(xì)胞生物學(xué)活性改變中的作用。
　　方法：
　　培養(yǎng)永生化人晶狀體上皮細(xì)胞，采用MTT法測(cè)量對(duì)照組和高糖作用的人晶狀體上皮細(xì)胞6、12、24、48、和72h的生物學(xué)活性的改變，免疫熒光法檢測(cè)人晶狀體上皮細(xì)胞ILK的免疫染色，Western blot法檢測(cè)對(duì)照組和高糖作用的人晶狀體上皮細(xì)胞6、24、和

6、72h ILK和α-SMA的蛋白表達(dá)水平。
　　結(jié)果：
　　1.高糖作用下晶狀體上皮細(xì)胞的增殖活力高于正常對(duì)照組和甘露醇組，在30.5mmol/L組最為明顯，而且隨高糖暴露時(shí)間的延長，在48和72h時(shí)細(xì)胞的增殖活力增加更顯著。
　　2.免疫細(xì)胞化學(xué)發(fā)現(xiàn)人晶狀體上皮細(xì)胞在5.5mmol/LD-葡萄糖條件下培養(yǎng)貼壁后ILK免疫染色主要分布在細(xì)胞質(zhì)。
　　3.Western blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)人晶狀體上皮細(xì)胞在30.5m

7、mol/LD-葡萄糖條件下培養(yǎng)6h、24h和72hILK的蛋白表達(dá)水平。高糖處理晶狀體上皮細(xì)胞6h和72h后，高糖組與正常對(duì)照組和甘露醇對(duì)照組相比，ILK的表達(dá)明顯升高，分別是正常組的1.25和1.28倍；在24hILK表達(dá)相近，高糖組是正常對(duì)照組的1.03倍；甘露醇組ILK的表達(dá)與正常對(duì)照組相近，分別是正常對(duì)照組的1.07、0.99和0.72倍。對(duì)照組和甘露醇組無顯著差別；人晶狀體上皮細(xì)胞在高糖條件下培養(yǎng)6h、24h、和72h后α-S