水楊酸鈉對體外培養(yǎng)的人晶狀體上皮細胞中HSP27表達的影響及意義.pdf

1、目的: 國內(nèi)外均有報道長期服用水楊酸鈉可延緩或阻止白內(nèi)障的發(fā)病，但其在預防白內(nèi)障方面的作用機制還未有明確的研究報道。本實驗觀察水楊酸鈉對H2O2誘導體外培養(yǎng)的人晶狀體上皮細胞中熱休克蛋白27（Heat Shock Protein 27，HSP27）表達的影響，探討水楊酸鈉在延緩白內(nèi)障發(fā)病中的作用機制。探討水楊酸鈉在防治原發(fā)性白內(nèi)障方面的可能性，為臨床上防治原發(fā)性白內(nèi)障提供新的可能的防治方法。
　　 材料及方法: 體外培養(yǎng)人晶狀體

2、上皮細胞，取第2、3代傳代培養(yǎng)的晶體上皮細胞。將細胞隨機分為三組：⑴正常對照組;⑵氧化損傷組（OS組）：細胞中加入150 μmol/L H2O2；⑶藥物作用組：細胞中分別加入不同濃度的水楊酸鈉（200mg/L、400mg/L、600mg/L、800mg/L、1000mg/L）和150 μmol/L H2O2。
　　 1.噻唑蘭染色法（MTT）：將細胞轉移入三個96孔培養(yǎng)板，分組處理，每組細胞設6個復孔，三個96孔培養(yǎng)板分別作用2

3、h、6h和16h后用MTT酶聯(lián)免疫檢測儀測定各孔吸光光度OD值。
　　 2.免疫細胞組化：制作細胞爬片，分組處理，作用6小時后用免疫細胞組化法檢測各組細胞中HSP 27的表達情況。
　　 3.RT－PCR法：分組處理細胞，作用6小時后提取各組細胞總RNA，用RT－PCR法檢測HSP 27 mRNA的表達情況。
　　 結果: 通過MTT法檢測得出：體外培養(yǎng)的晶狀體上皮細胞氧化損傷后細胞活力較正常對照組明顯降低（P＜

4、0.01）；三個作用時間下，各藥物作用組細胞活力均高于氧化損傷組（P＜0.01）,其中作用6h時，藥物作用組與氧化損傷組細胞活力差異最大且前一組細胞活力隨藥物濃度增加而上升并在600mg/L時達到高峰。免疫細胞組化法檢測得出：體外培養(yǎng)的人晶狀體上皮細胞均少量表達HSP 27。氧化損傷后HSP 27蛋白表達增加，藥物作用后HSP 27蛋白表達進一步增加且比氧化損傷組增加的程度更大，藥物濃度600mg/L時HSP 27蛋白表達水平達到高峰。

5、RT－PCR法檢測得出：體外培養(yǎng)的人晶狀體上皮細胞均少量表達HSP 27 mRNA。氧化損傷后HSP 27 mRNA表達增加，藥物作用后HSP 27 mRNA表達進一步增加且比氧化損傷組增加的程度更大，藥物濃度600mg/L時HSP 27 mRNA表達水平達到高峰。與各組細胞中HSP 27蛋白表達情況基本一致。
　　 結論: 經(jīng)H2O2處理后人晶狀體上皮細胞活力明顯低于于正常對照組,提示細胞活力的下降在白內(nèi)障的早期發(fā)展中起重要作