甲狀腺激素對生發(fā)基質(zhì)-腦室內(nèi)出血早產(chǎn)兔治療的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:
　　生發(fā)基質(zhì)-腦室內(nèi)出血(germinal matrix hemorrhage-intraventricularhemorrhage，GM-IVH)是造成早產(chǎn)兒獲得性腦損傷的常見原因之一，至少占了新生兒顱內(nèi)出血的80％以上。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道在胎齡＜32周或（和）出生體重＜1500g的早產(chǎn)兒中GM-IVH的發(fā)生率為20％～40％。我國早產(chǎn)兒GM-IVH的發(fā)生率大約為56.6％，明顯高于發(fā)達(dá)國家，其中重度出血的發(fā)生率為16.3％;大

2、約35％的存活患兒伴有不同程度的神經(jīng)系統(tǒng)功能障礙。通過顱腦核磁共振影像學(xué)研究顯示該病的病理學(xué)表現(xiàn)包括腦室周圍深部腦白質(zhì)局灶性壞死，囊性空洞形成，彌漫性腦白質(zhì)軟化，腦白質(zhì)萎縮以及腦室擴(kuò)大，神經(jīng)系統(tǒng)組織學(xué)基礎(chǔ)為少突膠質(zhì)細(xì)胞髓鞘化延遲。目前對于GM-IVH造成的髓鞘化障礙、繼發(fā)的不良神經(jīng)系統(tǒng)結(jié)局沒有行之有效的治療手段。有相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，創(chuàng)傷、炎癥等疾病會(huì)影響腦組織中甲狀腺激素脫碘酶的表達(dá)，進(jìn)而影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)甲狀腺激素的生物學(xué)功能。已有大量研

3、究證實(shí)甲狀腺激素可以促進(jìn)多發(fā)性硬化等脫髓鞘疾病患者少突膠質(zhì)前體細(xì)胞成熟、髓鞘形成，減輕中樞神經(jīng)系統(tǒng)癥狀。甲狀腺激素是否也可以通過上述機(jī)制促進(jìn)早產(chǎn)兒GM-IVH后腦損傷的修復(fù)？關(guān)于這方面的研究鮮見報(bào)道。
　　本文試圖通過動(dòng)物模型探討:(1) GM-IVH早產(chǎn)兔腦室周圍組織甲狀腺激素信號(hào)通路中相關(guān)蛋白的表達(dá)水平;(2)甲狀腺激素干預(yù)治療對上述相關(guān)蛋白表達(dá)的影響;(3)甲狀腺激素是否可以促進(jìn)GM-IVH早產(chǎn)兔腦組織中髓鞘磷脂堿性蛋白(m

4、yelin basic protein，MBP)的表達(dá)。
　　方法:
　　1、選擇孕29天孕兔進(jìn)行剖宮產(chǎn)（足月為孕32天），迅速取幼兔，共60只，給予保溫、奶粉喂養(yǎng)。將所有幼兔隨機(jī)分為正常組、單純GM-IVH模型組（簡稱模型組），GM-IVH模型+甲狀腺激素干預(yù)組（簡稱模型+甲狀腺激素組），每組各20只。參照腹腔注射丙三醇誘發(fā)GM-IVH的方法，模型制備方法如下:于生后3小時(shí)內(nèi)給早產(chǎn)兔腹腔注射50％丙三醇，劑量為10ml/k

5、g，24小時(shí)后行顱腦超聲篩查，模型+甲狀腺激素組中發(fā)生GM-IVH早產(chǎn)兔腹腔注射甲狀腺激素，即三碘甲腺原氨酸(triiodothyronine，T3)，劑量為20μg/kg·d，1/日。進(jìn)行上述操作同時(shí)，正常組早產(chǎn)兔腹腔注射等體積的生理鹽水，24小時(shí)后行顱腦超聲篩查。
　　2、將以上三組中的早產(chǎn)兔隨機(jī)分為出生后3天、7天、14天三個(gè)亞組，按上述時(shí)間點(diǎn)給予安樂死，冰上迅速分離腦組織，觀察大體標(biāo)本，選取腦室周邊區(qū)域組織，一部分置于-8

6、0℃冰箱中備用，一部分置于4％多聚甲醛溶液中備用，分別供蛋白印跡、免疫組化實(shí)驗(yàn)使用。
　　3、使用蛋白印跡的方法比較三組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)早產(chǎn)兔腦室周邊組織中2型甲狀腺激素脫碘酶(type2 iodothyronine deiodinase，D2)、3型甲狀腺激素脫碘酶(type3 iodothyronine deiodinase，D3)的表達(dá);采用免疫組化的方法比較三組中各個(gè)時(shí)間點(diǎn)上早產(chǎn)兔腦室周邊中MBP的表達(dá)情況。
　　4、統(tǒng)計(jì)

7、方法:采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件、Microsoft Excel2003進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，經(jīng)方差齊性檢驗(yàn)方差齊，多個(gè)樣本均數(shù)的比較采用LSD-t法檢驗(yàn)，若不滿足方差齊性則采用秩和檢驗(yàn)的方法。檢驗(yàn)水準(zhǔn)定為0.05，P值＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.01時(shí)具有顯著差異。
　　結(jié)果:
　　1、成功復(fù)制了早產(chǎn)兔GM-IVH模型
　　成功對孕29天的實(shí)驗(yàn)兔（孕足月為32天）行剖宮產(chǎn)獲得早產(chǎn)兔。通過頭

8、顱超聲、大體標(biāo)本觀察、組織HE染色觀察證實(shí)早產(chǎn)兔GM-IVH模型的成功制備。
　　2、早產(chǎn)兔腦組織中D2、D3的表達(dá)
　　在出生后3-14天，正常組早產(chǎn)兔腦組織中D2的表達(dá)量逐漸增加，模型組早產(chǎn)兔腦組織標(biāo)本中D2的表達(dá)量逐漸減少，且在相同時(shí)間上均低于正常組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;在出生后3-14天，正常組早產(chǎn)兔腦組織標(biāo)本中D3的表達(dá)量逐漸升高，模型組早產(chǎn)兔腦組織標(biāo)本中D3的表達(dá)量逐漸增加，且在相同時(shí)間上均高于正

9、常組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。
　　模型+甲狀腺激素組早產(chǎn)兔腦組織中D2表達(dá)量在7天、14天時(shí)均高于模型組的表達(dá)量，但低于正常組的表達(dá)量，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);模型+甲狀腺激素組早產(chǎn)兔腦組織中D3表達(dá)量在3天、7天、14天時(shí)均低于模型組的表達(dá)量，但高于正常組的表達(dá)量，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　3、腦組織中MBP的表達(dá)
　　模型組早產(chǎn)兔腦組織標(biāo)本中MBP的表達(dá)在出生后3天、7天、14

10、天逐漸降低，在相同時(shí)間上均低于正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);模型+甲狀腺激素組MBP的表達(dá)在出生后14天后高于模型組的表達(dá)量，低于正常組中的表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;但出生后3天、7天，模型組和模型+甲狀腺激素組腦組織中MBP的表達(dá)率無差異(P＞0.05)。
　　結(jié)論:
　　早產(chǎn)兔發(fā)生GM-IVH后，腦組織內(nèi)D2的表達(dá)量隨著時(shí)間的變化明顯減少，腦組織內(nèi)D3的表達(dá)量隨著時(shí)間的變化明顯增多，MBP的表達(dá)