一株辛格粒毛盤菌選育及其黑色素性質與結構研究.pdf

1、本文對一株辛格粒毛盤菌(Lachnum singerianum)進行原生質體誘變,并對突變株Ls-5發(fā)酵條件和胞內黑色素的提取、穩(wěn)定性、生物學活性以及結構進行研究,主要結果如下:
　　 1、L.singerianum原生質體制備的最佳條件為:2％纖維素酶、3％溶壁酶和3％蝸牛酶配制而成的復合酶,酶解溫度33℃,酶解時間3 h,在此最佳條件下,原生質體數(shù)量可達9.9×106個/mL;紫外誘變的最佳劑量為:20 W紫外燈下30 cm

2、處照射50 s;獲得的突變株Ls-5生物量較出發(fā)菌株提高26.70％,黑色素產(chǎn)量較出發(fā)菌株提高16.87％;
　　 2、Ls-5的最佳發(fā)酵條件為:20％馬鈴薯浸汁、葡萄糖20g/L、酵母膏5.0 g/L、酪氨酸0.01 g/L、硫酸鎂0.01 mol/L,、硫酸錳0.001 mol/L,、pH8.0、27℃、發(fā)酵8 d;
　　 3、Ls-5胞內黑色素的最佳提取工藝為:NaOH濃度0.8 mol/L、液料比150 mL/g

3、、提取溫度80℃、提取時間60 min,此時提取率達到12.05％;經(jīng)HC1酸解、有機溶劑(乙酸乙酯、氯仿、無水乙醇)萃取后,得到黑色素純品(8.85g/100g茵絲體);
　　 4、Ls-5胞內黑色素可溶于NaOH、氨水等堿性溶液,不溶于水、HC1及常見有機溶劑(乙酸乙酯、氯仿、乙醇、丙酮、乙醚等);在pH≥7時穩(wěn)定,pH≤6時產(chǎn)生沉淀;對光(紫外光、自然光)、還原劑(亞硫酸鈉)、添加劑(苯甲酸鈉、蔗糖、檸檬酸鈉)及一些金屬離

4、子(Na+、K+、Mg2+、Mn2+、Ca2+、Al3+)穩(wěn)定,而對過氧化氫、檸檬酸、Vc、Cu2+、Fe3+不穩(wěn)定;
　　 5、Ls-5胞內黑色素在濃度為200 mg/L時,總抗氧化能力相當于15.85mmol/Lα-生育酚;該黑色素還原能力的EC50值(吸光度為0.5時的濃度)為216.5 mg/L;濃度為200 mg/L時,該黑色素對·OH、DPPH·、O2-·的清除率以及對Fe2+的螯合率分別為52.64％、41.2％、

5、43.48％、45.37％,對應的IC50值(清除率為50％時的濃度)分別為180.87 mg/L、240 mg/L、275.27mg/L、214.7 mg/L,結果表明,Ls-5胞內黑色素具有較強的抗氧化能力;
　　 6、Ls-5胞內黑色素在210 nm處有最大吸收峰,吸光度值在210 nm到800 nm之間呈指數(shù)減小趨勢,表現(xiàn)出典型黑色素的特征;顯微電鏡掃描顯示Ls-5胞內黑色素呈塊狀、表面不規(guī)則的晶體結構;紅外光譜顯示該黑