粒毛盤菌YM404黑色素的純化、結(jié)構(gòu)及抗紫外輻射活性研究.pdf

1、本文對粒毛盤菌YM404黑色素的發(fā)酵條件、胞內(nèi)黑色素的提取工藝、胞外黑色素的分級分離、結(jié)構(gòu)、抗紫外輻射活性以及染色效果進(jìn)行了研究，主要結(jié)果如下：
　　考察碳源、氮源、金屬離子以及生長調(diào)控因子等對粒毛盤菌YM404菌株生長及黑色素積累的影響，獲得其最適發(fā)酵條件為：麥芽糖25g/L，酵母膏6g/L，氯化鐵1mmol/L，L-DOPA1.25mmol/L，蒸餾水1L，26℃，160r/min恒溫振蕩培養(yǎng)10d。在此條件下，粒毛盤菌黑色素

2、的生物量較優(yōu)化前增加了14.62%，黑色素產(chǎn)量較優(yōu)化前提高了22.74%。
　　在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，采用響應(yīng)面優(yōu)化獲得超聲波輔助提取粒毛盤菌YM404胞內(nèi)黑色素（LIM404-2）的最佳提取條件為：NaOH濃度為1.5mol/L、超聲功率82W、提取溫度75℃、提取時(shí)間33min；對酶種類、酶液濃度、液料比對YM404胞內(nèi)黑色素得率影響進(jìn)行研究，獲得酶解法提取粒毛盤菌YM404胞內(nèi)黑色素（LIM404-3）的最佳條件為：4%中性

3、蛋白酶液，液料比為20:1，37℃下提取4h。LIM404-2得率為12.50%，較堿溶酸沉法提取獲得的LIM404-1得率提高了5.04%，較LIM404-3得率提高了12.25%。
　　LIM404-1、LIM404-2和LIM404-3的紅外光譜分析表明，三種黑色素均具有真菌黑色素的特征吸收峰，其余各特征吸收峰位置相近，表明不同的提取工藝獲得的是同一種類吲哚型黑色素。相比于LIM404-1和LIM404-2，LIM404-3

4、的結(jié)構(gòu)最完整。總抗氧化活性測定結(jié)果表明三種黑色素菌具有較強(qiáng)的總抗氧化能力，其中LIM404-3的總抗氧化能力最強(qiáng)。
　　從粒毛盤菌YM404發(fā)酵液中提取獲得胞外黑色素LEM404，分級分離后獲得5種均一組分，分別為LEM404-a、LEM404-b、LEM404-c、LEM404-d和LEM404-e。其中LEM404-a為主要組分，其含量為57.78%，分子量為432.18。依據(jù)元素分析及質(zhì)譜推斷其分子式為C22H12N2O4S

5、2，為棕黑色素。紅外光譜分析表明LEM404-a具有真菌黑色素的特征吸收峰，并具有典型的吲哚結(jié)構(gòu)。熱解-GC-MS與1HNMR的分析結(jié)果表明LEM404-a的基本骨架為吡咯與苯環(huán)，確定其結(jié)構(gòu)式。
　　在紫外輻射下，LEM404-a可顯著提高大腸桿菌、金黃色葡萄球菌以及啤酒酵母的存活率。小鼠抗輻射實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，高輻射劑量實(shí)驗(yàn)組（HE組）小鼠皮膚基本未出現(xiàn)水腫、角質(zhì)化及褐色素沉著，而低輻射劑量實(shí)驗(yàn)組（LE組）小鼠皮膚表征接近于空白對照