內質網應激與心肺復蘇后腦損傷的關系及干預研究.pdf

1、【目的】最近在許多缺血再灌注損傷的研究中都發(fā)現，內質網應激在腦損傷的病理生理中起著非常重要的作用，且抑制內質網應激可對腦組織起到一定的保護作用。本研究將SD大鼠作為研究對象，建立心臟驟停及心肺復蘇模型，探討內質網應激與心肺復蘇后腦損傷的相關性，并使用內質網應激抑制劑Salubrinal進行干預，初步闡明其可能的作用機制。
　　【方法】：實驗一，對SD大鼠采用經皮電刺激心外膜法制備心臟驟停模型并成功進行復蘇，分別在造模前和復蘇后1小

2、時、3小時、6小時、12小時和24小時處死大鼠，取海馬組織進行RT-PCR和western blot實驗，分析內質網應激標記物（GRP78和XBP-1）和內質網應激凋亡蛋白(CHOP和caspase12)的表達趨勢。實驗二，SD大鼠隨機分為3組：（1）sham組：僅進行麻醉、經口氣管插管和動靜脈置管操作；（2） Sal+CPR組：采用經皮電刺激心外膜法制備心臟驟停模型并成功進行心肺復蘇，在造模前30分鐘，腹腔注射Salubrinal(S

3、al,1 mg/kg)，（3）DMSO+CPR組：采用經皮電刺激心外膜法制備心臟驟停模型并成功進行心肺復蘇，在造模前30分鐘，腹腔注射等量的DMSO。心肺復蘇后24小時觀察各組大鼠生存情況，利用NDS評分系統評價各組大鼠的神經功能情況。隨后過量麻醉處死大鼠，取腦組織進行后續(xù)研究：①通過透射電鏡觀察各組大鼠腦組織內質網和線粒體的損傷情況；② TUNEL染色觀察各組大鼠海馬CA-1區(qū)凋亡情況；③免疫組化觀察各組海馬CA-1內質網應激標記物（

4、GRP78和XBP-1）和內質網應激凋亡蛋白（CHOP和caspase12）的變化；④Western blot方法檢查各組大鼠腦皮質eIF2α、p-eIF2α、CHOP和caspase12蛋白的變化情況。⑤提取各組大鼠腦皮質線粒體，化學發(fā)光法測定線粒體通透性轉換孔（mitochondrial permeability transition pores，mPTP）變化情況；⑥取各組大鼠腦皮質制作單細胞懸液，化學發(fā)光法測定細胞內Ca2+濃度

5、變化情況；⑦取各組大鼠腦皮質組織通過試劑盒檢測丙二醛（malondialdehyde，MDA）和超氧化歧化酶（superoxide dismutase，SOD）的變化情況。
　　【結果】實驗一，心肺復蘇后，GRP78、XBP-1、CHOP和caspase12的mRNA和蛋白表達在復蘇后持續(xù)增加。實驗二，①與sham組相比，DMSO+CPR組和Sal+CPR組大鼠在復蘇后24小時NDS評分均明顯增高（P<0.01），與DMSO+CP

6、R組相比，Sal+CPR組大鼠NDS評分顯著降低（P<0.05）；②與sham組相比，DMSO+CPR組和Sal+CPR組大鼠海馬CA-1區(qū)凋亡的神經細胞明顯增多（P<0.01）），與DMSO+CPR組相比，Sal+CPR組凋亡的神經細胞明顯減少（P<0.01））；③與sham組相比，DMSO+CPR組和Sal+CPR組大鼠海馬內質網均有不同程度的損傷，與DMSO+CPR組相比，Sal+CPR組大鼠海馬內質網損傷明顯減輕；④與sham組

7、相比，DMSO+CPR組和Sal+CPR組大鼠海馬CA-1區(qū)GRP78、XBP-1、CHOP和caspase12的表達明顯增強，與DMSO+CPR組相比，Sal+CPR組減少了XBP-1、CHOP和caspase12的表達強度，增加了GRP78的表達；⑤與sham組相比，DMSO+CPR組和Sal+CPR組大鼠皮質線粒體均有不同程度的損傷，但是Sal+CPR組大鼠皮質線粒體損傷明顯較DMSO+CPR組減輕；⑥與sham組相比，DMSO+

8、CPR組和Sal+CPR組大鼠皮質的p-eIF2α/eIF2α、CHOP和caspase12蛋白表達明顯增加（P<0.01），與DMSO+CPR組相比，Sal+CPR組明顯減少CHOP和caspase12蛋白的表達（P<0.01），增加p-eIF2α/eIF2α的表達；⑦與sham組相比，DMSO+CPR組和Sal+CPR組大鼠皮質線粒體mPTP明顯增加（P<0.01），與DMSO+CPR組相比，Sal+CPR組皮質線粒體mPTP顯著下

9、降（P<0.01）；⑧與sham組相比，DMSO+CPR組和Sal+CPR組大鼠腦皮質單細胞懸液中Ca2+濃度均明顯上升（P<0.01），與DMSO+CPR組相比，Sal+CPR組大鼠腦皮質單細胞懸液中Ca2+濃度均明顯下降（P<0.01）。⑨與sham組相比，DMSO+CPR組和Sal+CPR組的SOD活性下降（P<0.01）；與DMSO+CPR組相比，Sal+CPR組SOD活性增高（P<0.01）。⑩與sham組相比，DMSO+CP