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文檔簡介
1、目的:ATRA對于足細胞損傷具有保護作用,但具體機制尚不明確。本實驗通過構(gòu)建足細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激損傷模型,初步探討PDK1/AKT通路在ATRA足細胞損傷保護中的作用。
方法:體外條件下培養(yǎng)永生化小鼠足細胞細胞系,應(yīng)用TM(5μg/ml)構(gòu)建內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激損傷模型,將足細胞分為3組:對照組、TM組、ATRA組。通過流式細胞術(shù)檢測對照組和損傷組不同時間點(0,4,8,12,24h)足細胞凋亡情況;RT-PCR檢測不同時間點(0,6,12
2、h)各組足細胞GRP78、PDK1、AKT、CHOPmRNA表達情況;Western-blotting檢測不同時間點(0,6,12h)各組GRP78、PDK1、AKT、p-AKT、CHOP蛋白表達情況。
結(jié)果:TM成功構(gòu)建細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的損傷模型。與對照組相比,TM組中足細胞凋亡隨時間延長進行性升高(P﹤0.05);GRP78、CHOPmRNA和蛋白表達呈時間依賴性表達上調(diào)(P﹤0.05);AKT,PDK1mRNA和蛋白表達未
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