內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在蛛網(wǎng)膜下腔出血后早期腦損傷中作用的研究.pdf

1、蛛網(wǎng)膜下腔出血（subarachnoidhemorrhageSAH）是指由于各種原因使血液進入顱內(nèi)或椎管內(nèi)的蛛網(wǎng)膜下腔。分為顱腦損傷性和自發(fā)性（非損傷性）兩大類。自發(fā)性蛛網(wǎng)膜下腔出血(aneurysmsubarachnoidhemorrhageaSAH)的發(fā)病率為10人/10萬人,第一次出血的死亡率為40％，第二次出血死亡率為60%。出血后幸存的患者1/3失去生活自理能力。其發(fā)病機理復(fù)雜，今年來由國外學(xué)者提出早期腦損傷（EBI）的理論。

2、但對于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(ERS)在自發(fā)性蛛網(wǎng)膜下腔出血后早期腦損傷中所起的作用尚不清楚。
　　目的：
　　建立大鼠自發(fā)性蛛網(wǎng)膜下腔出血模型，觀察海馬區(qū)神經(jīng)元細胞凋亡與檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(ER)特異性因子caspase-12的時相性表達，為進一步研究內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在蛛網(wǎng)膜下腔出血后早期腦損傷中的作用機制提供基礎(chǔ)理論依據(jù)。
　　方法：
　　1.通過視交叉池注入自體動脈血的方法，建立大鼠自發(fā)性蛛網(wǎng)膜下腔出血動物模型；
　　2.參照

3、Kaoutzanis等的行為學(xué)評分，對大鼠造模后行為學(xué)改變進行評分；
　　3.采用TUNEL法對凋亡的海馬區(qū)神經(jīng)元細胞進行定量，利用RealTime-PCR技術(shù)檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)特異性因子caspase-12的表達。
　　4.通過光鏡及電鏡觀察大鼠海馬區(qū)神經(jīng)元細胞的動態(tài)病理變化。
　　結(jié)果：
　　1.在本模型中，利用HE染色和MASSON染色發(fā)現(xiàn)實驗組大鼠蛛網(wǎng)膜下腔內(nèi)大量紅細胞，出現(xiàn)明顯的神經(jīng)行為學(xué)癥狀；實驗組神經(jīng)功能學(xué)

4、評分與空白組存在顯著差異。
　　2．大鼠在發(fā)生自發(fā)性蛛網(wǎng)膜下腔出血后，海馬區(qū)神經(jīng)元細胞確實發(fā)生了凋亡，與3小時時間段開始表達，但對于空白組和對照組相比無統(tǒng)計學(xué)意義。神經(jīng)元細胞在24小時時間段到達高峰，在之后的48小時時間段開始下降但對于空白組和對照組相比仍具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。72小時時間段對于空白組和對照組相比具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。
　　3.細胞形態(tài)學(xué)的改變：光鏡下可以看到空白組大鼠海馬區(qū)細胞排列有序，

5、極性好，神經(jīng)元細胞輪廓清晰，大小形態(tài)好，細胞核大呈淡藍色，胞漿呈淡紅色，比例適中。實驗組大鼠海馬帶變窄，細胞排列紊亂，極性差，神經(jīng)元細胞變性，細胞核變小顏色深染，胞漿比例失調(diào)，可見明顯核固縮。電鏡下可看到空白組大鼠神經(jīng)元細胞大小均勻，線粒體及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)結(jié)構(gòu)清晰無擴張等病理性改變，神經(jīng)纖維顯示清晰，髓鞘結(jié)構(gòu)完整。突觸及突觸結(jié)構(gòu)未見異常改變?？梢钥吹綄嶒灲M大鼠1小時時間段時核內(nèi)異染質(zhì)增多，3小時時間段核內(nèi)異染質(zhì)明顯增多，6小時時間段組可見胞比例

6、失調(diào)，水腫明顯。24小時時間段組可見處于凋亡時的改變，細胞核內(nèi)異染質(zhì)增多，核皺縮、變小，沿核膜可見齒狀突起，核內(nèi)異染質(zhì)增多，染色質(zhì)發(fā)生了質(zhì)的變化。48小時時間段組還可看到細胞處于缺血缺氧的改變，神經(jīng)元細胞明顯水腫，胞漿空殼。72小時可以看到明顯的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張。
　　4.大鼠海馬區(qū)神經(jīng)元細胞凋亡和caspase-12表達的關(guān)系：通過兩者相關(guān)性分析認為兩者存在相關(guān)性（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1．大鼠在發(fā)生自發(fā)性蛛網(wǎng)

7、膜下腔出血后，海馬區(qū)神經(jīng)元細胞確實發(fā)生了凋亡，3小時開始表達但對于空白組和對照組相比無統(tǒng)計學(xué)意義，24小時達高峰，48小時開始下降但對于空白組和對照組相比仍有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　2．大鼠在發(fā)生自發(fā)性蛛網(wǎng)膜下腔出血后，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)特異性因子caspase-12出現(xiàn)了時相性變化，24小時達高峰，72小時仍高于正常。
　　3．內(nèi)質(zhì)網(wǎng)特異性因子caspase-12的表達與海馬區(qū)神經(jīng)元凋亡細胞數(shù)存在相關(guān)性。說明內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在自發(fā)性蛛網(wǎng)膜下腔出血