他莫昔芬在大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血后早期腦損傷中的神經(jīng)保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf

1、第一部分：他莫昔芬在大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血后早期腦損傷中的神經(jīng)保護(hù)作用
　　目的：應(yīng)用蛛網(wǎng)膜下腔出血（SAH）后早期腦損傷（EBI）模型，探討他莫昔芬（Tamoxifen TMX）對(duì)大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血后早期腦損傷是否具有神經(jīng)保護(hù)作用。
　　方法：48只健康成年雄性SD大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組（n=12），SAH組（n=12），安慰劑組（n=12）和他莫昔芬治療組（n=12）。應(yīng)用視交叉前池一次注血法制成SAH后EBI模型，在蛛網(wǎng)膜下腔

2、出血后2h、24h及36h分別腹腔注射他莫昔芬，48小時(shí)后處死大鼠，取顳底皮層腦組織做標(biāo)本，測(cè)定腦水腫變化及血腦屏障變化，探討他莫昔芬對(duì)大鼠SAH后EBI是否具有神經(jīng)保護(hù)作用。
　　結(jié)果：與對(duì)照組相比，SAH組大鼠腦組織含水量明顯增加，48h時(shí)水腫百分?jǐn)?shù)達(dá)到82.51%，血腦屏障破壞明顯，48h時(shí)測(cè)定皮層腦組織伊文氏藍(lán)（EB）含量達(dá)到21.5 ng/mg；與SAH組相比，他莫昔芬治療后大鼠腦水腫指數(shù)降低，48h時(shí)水腫百分?jǐn)?shù)80.5

3、5%，血腦屏障功能改善，48h時(shí)測(cè)定皮層腦組織EB含量13.2ng/mg；安慰劑組與SAH組相比改善不明顯。
　　結(jié)論：1．通過(guò)構(gòu)建大鼠SAH模型，能夠觀察到大鼠SAH后48h腦組織含水量增加明顯，血腦屏障破壞明顯，說(shuō)明SAH后存在EBI。2．應(yīng)用他莫昔芬治療后，能有效降低SAH后腦水腫、改善血腦屏障，提示他莫昔芬對(duì)大鼠SAH后EBI具有神經(jīng)保護(hù)作用。
　　第二部分：他莫昔芬對(duì)大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血后大腦皮層炎癥信號(hào)通路的干預(yù)研

4、究
　　目的：研究SAH后大腦皮層TLR4（Toll樣受體4）/NF-κB（核因子κB）信號(hào)通路及其下游炎癥因子及細(xì)胞活素的表達(dá)變化及他莫昔芬對(duì)TLR4/NF-κB信號(hào)通路的干預(yù)作用，探討他莫昔芬對(duì)SAH后EBI神經(jīng)保護(hù)作用機(jī)制。
　　方法：60只健康成年雄性SD大鼠隨機(jī)分為：對(duì)照組(n=15), SAH組(n=15), SAH+安慰劑組(n=15)和 SAH+他莫昔芬治療組(n=15)。采用立體定向注射技術(shù)，構(gòu)建視交叉前池

5、一次注血SAH模型，對(duì)照組開骨窗但不注入動(dòng)脈血，他莫昔芬治療組給予他莫昔芬腹腔注射治療，每次注射劑量5mg/kg，在SAH后2h、24h、36h分別腹腔注射。安慰劑組注射等容量溶劑，溶劑為1%乙醇。48小時(shí)后處死大鼠，取顳底皮層腦組織做標(biāo)本，采用Western blot法測(cè)定TLR4、NF-κB及ICAM-1表達(dá)情況；免疫組化法檢測(cè)TLR4、NF-κB及ICAM-1表達(dá)，EMSA測(cè)定NF-κB的DNA活性。通過(guò)ELISA方法分析大鼠腦皮

6、層中細(xì)胞活素因子IL-1β, TNF-α和IL-6表達(dá)情況比較。
　　結(jié)果：Western blot結(jié)果顯示對(duì)照組TLR4、NF-κB及ICAM-1蛋白水平較弱；與對(duì)照組相比，SAH組TLR4、NF-κB及ICAM-1蛋白水平明顯增高(P<0.01)；SAH組與安慰劑組對(duì)比無(wú)明顯差異(P>0.05)；他莫昔芬治療組中TLR4、NF-κB及ICAM-1蛋白水平明顯低于SAH組與安慰劑組(P<0.01)。免疫組化（TLR4、NF-κB

7、及ICAM-1蛋白免疫反應(yīng)性主要在神經(jīng)元細(xì)胞，細(xì)胞核棕色黃染代表陽(yáng)性）結(jié)果顯示對(duì)照組TLR4、NF-κB及ICAM-1陽(yáng)性率較低；與對(duì)照組相比，SAH組TLR4、NF-κB及ICAM-1陽(yáng)性率明顯增高(P<0.01)；SAH組與安慰劑組對(duì)比無(wú)明顯差異(P>0.05)；他莫昔芬治療組中TLR4、NF-κB及ICAM-1陽(yáng)性率低于SAH組及安慰劑組(P<0.01)。EMSA結(jié)果顯示對(duì)照組NF-κB的結(jié)合活性較弱；與對(duì)照組相比，SAH組NF-

8、κB的結(jié)合活性明顯增高(P<0.01)；SAH組與安慰劑組對(duì)比無(wú)明顯差異(P>0.05)；他莫昔芬治療組中NF-κB的結(jié)合活性明顯低于SAH組與安慰劑組（P<0.01）。ELISA結(jié)果顯示對(duì)照組中IL-1β, TNF-α和IL-6表達(dá)水平較低；與對(duì)照組相比，SAH組IL-1β, TNF-α和IL-6表達(dá)水平明顯增高(P<0.01)；SAH組與安慰劑組對(duì)比無(wú)明顯差異(P>0.05)；他莫昔芬治療組中IL-1β, TNF-α和IL-6表達(dá)水